【摘 要】
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芽孢杆菌(Bacillus)是常见的生防菌株,产生多种抑菌物质且大多具有很好的稳定性,对人畜无害,在农业中被广泛运用。关于芽孢杆菌的很多研究已进入分子水平,随着转座子突变技术
【机 构】
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海南大学植物保护学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室;
【基金项目】
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海南大学科研启动经费(No.KYQD(ZR)1842);海南大学青年教师基金(hdkyxj201708);海南省产学研项目(No.CXY20140038)
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芽孢杆菌(Bacillus)是常见的生防菌株,产生多种抑菌物质且大多具有很好的稳定性,对人畜无害,在农业中被广泛运用。关于芽孢杆菌的很多研究已进入分子水平,随着转座子突变技术的大量运用,该技术转而运用于研究生防菌的生防机制已成为热点。HN-2为本实验室分离鉴定的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),室内平板实验显示对杧果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz)和水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzaepv.oryzae,Xoo)等多种植物病原真菌细菌均有明显的抑菌效果。为明确调控该菌株生防能力的基因的功能,本研究构建贝莱斯芽孢杆菌HN-2的突变体文库,然后通过定点敲除贝莱斯芽孢杆菌HN-2中与抑菌相关基因,研究其代谢机理。本研究已成功建立贝莱斯芽孢杆菌HN-2的转化体系,将含有转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA转化到HN-2菌株中,再高温诱导TnYLB-1转座子随机插入基因组序列中,通过抗性平板筛选以及PCR验证,得到突变体1 830个;血平板筛选得到溶血圈有显著变化的突变体16个,利用Southern杂交技术确定13个突变体中的转座子已成功地单拷贝、随机插入在HN-2菌株的基因组中。通过反向PCR克隆转座子插入位点的侧翼序列,克隆鉴定被插入基因的功能,转而定点敲除HN-2菌株的该段基因,观察HN-2菌株抑菌能力的变化,从而验证被插入基因的功能。本研究对研究贝莱斯芽孢杆菌HN-2活性基因功能、揭示其生防作用机理以及合成生物学提供理论依据。
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