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羊肚菌(Morchella spp.)是一种食药兼用的珍稀食用菌。凝集素是一类含有糖基特异性识别结合结构域的糖蛋白,具有免疫调节,抗肿瘤,抗菌的功能。本文通过对梯棱羊肚菌(Morchella importuna)基因组和转录组数据进行挖掘分析,鉴定到一个凝集素编码基因MIL,对该基因及其编码蛋白进行生物信息学分析,采用qRT-PCR分析了MIL基因在梯棱羊肚菌不同生长阶段的表达量,通过原核外源表达获得了凝集素蛋白MIL,并测定其生物学活性。研究表明,梯棱羊肚菌MIL基因序列为426 bp,编码111个氨基酸;MIL蛋白分子量为12.47kDa,理论等电点为7.97,不稳定系数为68.89,脂肪系数为72.07;其中含有一个RicinB lectin保守结构域,同源性达79%,没有发现明显的信号肽序列,表明该蛋白可能属于胞内蛋白,这与亚细胞定位预测结果一致;RT-PCR定量分析显示,在梯棱羊肚菌白色菌核和黄色菌核发育阶段MIL基因表达量最高,其次为原基阶段、幼菇阶段和成熟子囊果阶段,而在菌丝阶段表达量最低。上述结果表明,MIL基因可能在梯棱羊肚菌菌核形成中起到某种调控作用;梯棱羊肚菌MIL的大肠杆菌工程菌在0.6mM IPTG终浓度下18℃诱导16h,以所得大肠杆菌菌体超声破碎后的上清过镍柱,获得纯化的MIL-His蛋白;试验结果表明,MIL-His具有血凝活性,兔红细胞在0.32mg/ml和更高浓度的MIL-His存在时完全凝集。同时发现MIL-His具有刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖的活性,与对照相比增值率达30.4%。