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目的:研究柚皮苷对体外培养皮肤角质形成细胞HaCaT细胞TNF-α和IFN-γ诱导性产生炎性趋化因子RANTES的影响,并探讨其初步的作用机制。方法:MTT比色法观察柚皮苷对细胞增殖的影响。采用ELISA测定细胞培养上清液中的RANTES含量。荧光定量PCR扩增方法检测RANTES mRNA的表达;免疫组织化学方法检测NF-κB P65蛋白的表达;Western blot检测核中NF-κB P65蛋白。结果:MTT结果显示HaCaT对柚皮苷各浓度(1,0.5,0.25mmol/L)反应不敏感,细胞增殖几乎不受影响。ELISA结果显示:基础状态下细胞培养上清液中仅内有微量RANTES蛋白的表达。TNF-α20ng/ml和IFN-γ20ng/ml联合作用24 h和48 h后可显著诱导细胞分泌RANTES;0.5 mmol/L、0.25 mmol/L柚皮苷能明显抑制诱导性的RANTES的产生。实时荧光定量PCR反应检测表明模型组为阴性对照组的64倍,柚皮苷0.5 mmol/L预处理后,RANTES表达降低1倍。免疫组织化学法检测显示模型组NF-κB P65染色呈强阳性,胞浆和胞核均可见,以胞核较为明显:柚皮苷(0.5mmol/L)预处理细胞后,NF-κB P65核移位明显降低。Western Blotting分析显示TNF-α联合IFN-γ刺激能明显增加P65亚单位在核内的表达,0.5 mmol/L柚皮苷能减少P65向核内的转移。结论:柚皮苷可以抑制诱导性RANTES的产生,并从基因转录水平上抑制蛋白的表达。柚皮苷抑制诱导性RANTES mRNA表达及其蛋白产生部分机制是通过抑制NF-κB信号传导途径的活化实现的。