MC-LR诱导SD大鼠生殖细胞凋亡的体内研究及NAC的保护效应

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目的观察微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对SD大鼠睾丸组织生殖毒性作用,探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acety lcy steine,NAC)在MC-LR致睾丸生殖毒性过程中的保护效应。方法将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为8组,分别为对照(0.9%生理盐水)组,低剂量(10μg/kg.b.w)组,中剂量(20μg/kg.b.w)组,高剂量(40μg/kg.b.w)组,NAC(150 mg/kg.b.w)组,NAC+10μg/kg.b.w组,NAC+20μg/kg.b.w组,NAC+40μg/kg.b.w组,经腹腔注射,染毒14天后,将睾丸取出,用4%多聚甲醛固定后,经石蜡包埋切片,分别用HE染色法观察睾丸组织形态学变化,TUNEL染色法观察染毒后睾丸组织发生凋亡情况以及免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况,并对免疫组织化学图像使用IPP6.0软件进行分析。结果 HE染色结果显示,随着染毒浓度的增加,与对照组相比,睾丸组织结构疏松,生精上皮变薄,生精小管管腔变大,精子少见甚至消失,间质组织断裂,在各染毒组加入NAC进行预处理后,与单纯染毒组相比,睾丸组织形态结构有明显改善,生精上皮变厚,生精小管管腔缩小,精子数量增加,问质组织断裂情况得到显著抑制;TUNEL染色法观察睾丸凋亡结果显示,与对照组相比,各染毒组均有明显的凋亡发生,且随着染毒浓度的增加,凋亡率逐渐升高,当各染毒组经NAC预处理后,与单纯染毒组相比,睾丸组织凋亡率下降;免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2结果显示,与对照组相比,Bax蛋白表达量随着染毒浓度的增加逐渐升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量随染毒浓度的增加逐渐减少(P<0.05),经NAC预处理后,各染毒组中Bax蛋白表达量与单独染毒组相比,有明显抑制(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量相对于单独染毒组有显著的增多(P<0.05)。结论 NAC可以抑制MC-LR诱导的SD大鼠睾丸组织损伤,氧化应激引起的细胞凋亡可能是MC-LR引起SD大鼠睾丸生殖毒性的一种机制。
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