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中间锦鸡儿(Caragana intermedia)系豆科锦鸡儿属(Caragana Fabr,Leguminosae)旱生落叶灌木,具有极强的生态适应性,对严寒、干旱、盐碱以及瘠薄等逆境胁迫具有良好的抵御能力,是研究植物抗逆机制和挖掘抗逆基因的理想材料。本研究建立了中间锦鸡儿叶片瞬时表达体系,并对瞬时表达过程中所用到的表面活性剂的种类、浓度以及农杆菌菌株遗传背景等条件进行了优化。基于前期构建的中间锦鸡儿干旱转录组数据库,对AP2/ERF(Apetala2/Ethylene Response Factor)类转录因子家族基因进行了初步的筛选、鉴定、生物信息学分析以及表达模式分析等,从中挑选了2个基因在拟南芥和中间锦鸡儿中进行抗逆相关功能的验证。另外,本研究还筛选得到1条ABR17(ABA responsive protein 17)基因序列,并在拟南芥中对其功能进行了分析。具体研究结果如下:1.首次构建了农杆菌介导的中间锦鸡儿叶片瞬时表达体系,并对该体系进行了优化:最适的表面活性剂为Silwet L-77、最适浓度为0.001%以及最适农杆菌菌株为GV3101。2.对中间锦鸡儿干旱转录组数据库中的AP2/ERF类转录因子进行了筛选,最终得到具有完整开放阅读框(Open reading frame,ORF)的序列22条,其中DREBA1组3条、DREB A2 组2条、DREB A4 组2条、DREB A5 组4条、DREB A6 组1条、ERF B1组2条、ERF B3组7条以及RAV组1条。3.应用qRT-PCR技术对筛选出的AP2/ERF转录因子表达模式进行检测,其中大部分都具有组织表达特异性,且均能受到冷、热、盐和甘露醇等胁迫的不同程度的诱导。4.对AP2/ERF类转录因子中的CiDREB1C的cDNA进行克隆。CiDREB1C的cDNA序列为1437 bp,其中ORF为609 bp,编码203个氨基酸,与蒺藜苜蓿MtERF021(Medtr1g060910)的同源性最高,序列相似性为64.2%;与拟南芥AtERF030(At4g25470)的同源性最高,序列相似性为43%。构建pCanG-CiDREB1 C-HA植物异源表达载体,利用转基因拟南芥对该基因的功能研究发现:异源表达CiDREB1C降低了转基因拟南芥种子的萌发率、减缓了拟南芥的生长发育过程,提高了对渗透胁迫和冷胁迫的耐受性,并且增强了抵御黑暗诱导的叶片衰老的能力。瞬时表达CiDREB1C增强了转基因中间锦鸡儿对干旱、盐以及ABA的耐受性。5.对AP2/ERF类转录因子中的CiDRE-B3的cDNA进行了克隆。CiDREB3的cDNA序列为903 bp,其中ORF为666 bp,编码222个氨基酸,与蒺藜苜蓿MtERF025(Medtr2g101340)的同源性最高,序列相似性为61.1%;与拟南芥AtERF041(At5g11590)的同源性最高,序列相似性为48%。构建了pCanG-CiDREB3-HA植物异源表达载体,利用转基因拟南芥对该基因的功能进行研究发现:异源表达CiDREB3降低了转基因拟南芥种子的萌发率、减缓了拟南芥的生长发育过程,并且提高了转基因拟南芥的抗旱性。6.从中间锦鸡儿干旱差减库中筛选得到CiABR17基因EST序列并通过RACE扩增得到完整ORF序列,CiABR17的cDNA序列为594 bp,ORF为471 bp,编码157个氨基酸。与蒺藜苜蓿、鹰嘴豆和豌豆中的ABR17相似性均较高。CiABR17在脱水、NaCl和热胁迫下均有不同程度的诱导表达,特别是对脱水响应较为显著。异源表达CiABR17拟南芥株系鲜重、干重和莲座直径与野生型相比均有明显的增加。