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Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)和水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)同属于α疱疹病毒亚科,都可以引起人类疾病。HSV-2主要导致严重的生殖器疾病,与生理疾病(如生殖器溃疡和炎症)和心理社会问题有关。目前可用的抗病毒药物有一定的局限性,而且尚未研制出可用的疫苗。VZV是引起水痘-带状疱疹的主要病原体。VZV病毒可以神经潜伏,在宿主免疫低下时会重新复发,且会引起带状疱疹后神经痛。感染VZV病毒后的治疗,急需开发新的治疗方法,寻找新的抗病毒机制。miRNA是一种小的非编码RNA分子,可以通过靶向mRNA调控基因表达参与许多细胞过程。病毒感染的宿主细胞可以调节细胞miRNA的表达,通过直接与病毒基因组结合或通过调节先天免疫途径和细胞因子反应抑制病毒复制。例如,miR-101可以通过靶向ATP合酶亚单位(ATP5B)抑制HSV-1复制。miRNA在对抗病毒感染的应用中有巨大的潜能,但由于缺少有效的递送系统,miRNA的应用存在阻碍。外泌体是一种脂质双分子层包被的纳米囊泡,直径约为30-150nm。外泌体含有蛋白质、脂质和核酸,可以从产生细胞转移到受体细胞,促进细胞间的通讯。外泌体是miRNA的天然载体,可以作为基因传递系统。外泌体基因递送相比传统的递送系统有以下几个优点:具有良好的耐受性,细胞毒性较小等。本文旨在研究外泌体递送miR-101进入细胞对HSV-2和VZV两种病毒复制的抑制作用。本论文通过转染miR-101的模拟物和抑制检测miR-101表达上调或下调对HSV-2病毒复制的影响。通过RT-PCR、Western Blotting和细胞免疫荧光法证明miR-101对HSV-2病毒有抑制作用。应用Western Blotting和透射电子显微镜(TEM)对差速离心方法纯化制备的外泌体进行了鉴定,结果显示成功制备Hela细胞分泌的外泌体。通过RT-PCR法对比不同负载方法的外泌体中miR-101表达量,确定采用改良氯化钙为外泌体负载miR-101。最后应用RT-PCR、Western Blotting和细胞免疫荧光法,证明外泌体递送miR-101抑制HSV-2在Hela细胞中复制。接下来采用相同的实验方法检测miR-101对VZV在细胞中的复制作用的影响。通过RT-PCR、Western Blotting和细胞免疫荧光法证明了miR-101对VZV病毒有抑制作用。应用Western Blotting和TEM表征MRC5细胞分泌的外泌体。最后应用RT-PCR、Western Blotting和细胞免疫荧光法,外泌体递送miR-101模拟物实验组VZV在细胞中复制减少。综上所述,本论文证明miR-101对HSV-2和VZV两种病毒有抑制作用。利用外泌体递送系统成功负载miR-101模拟物从而抑制HSV-2和VZV病毒的复制。这为以后外泌体递送miRNA抗病毒提供了技术方法和实验依据。