副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、拟态弧菌(Vibrio mimicus)等致病性弧菌都是重要的食源性致病菌,广泛存在于海水、海底沉积物以及鱼贝虾蟹等海产品中,人们食用受该类菌污染的食物后会引起腹泻、呕吐、发烧等典型胃肠炎反应,重症患者还会脱水、休克,甚至死亡。1998年以来的报道显示,副溶血性弧菌引发的食物中毒的发生规模及人群暴露规模呈明显上升趋势,均已超过沙门氏菌,跃居我国细菌性食物中毒的首位。因此,发展一套高通量、快速、准确、全面的常见致病性弧菌的检测和分型方法是保障食品质量安全和应对水产品来源食物中毒事故的关键。针对副溶血性弧菌运用ERIC-PCR分子分型方法,分析了副溶血性弧菌标准菌株和分离株的参考指纹图谱,初步探讨了ERIC-PCR技术在副溶血性弧菌流行病学调查和同源性追踪上的应用价值;并结合PCR技术检测了副溶血性弧菌不同菌株所携带毒力基因耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接相关溶血素基因(trh)的情况,以分析毒力菌株的分布,为预防与治疗食物中毒提供科学依据。结果显示,通过ERIC-PCR技术,26株副溶血性弧菌都可扩增产生可重复的DNA指纹图谱,可将26株菌分为12个型,分辨力指数为0.926,并且与脉冲场凝胶电泳(PFGE)的分型验证结果基本一致;毒力基因检测的结果表明,只在临床分离菌株中检测到了tdh基因,而除一株标准菌株外,其它菌株都未检测到trh基因。根据编码副溶血性弧菌的不耐热直接溶血素(TLH)、耐热直接溶血素(TDH)和TOXR蛋白的tlh、tdh、toxR基因以及16S rDNA四种基因设计引物和探针,进行多重PCR扩增和芯片检测,并通过40株菌来对该方法进行评价。所有副溶血性弧菌菌株都在相应探针处检测到阳性信号,仅有溶藻弧菌和拟态弧菌在16S rDNA探针处显示假阳性信号,而在tlh、tdh、toxR探针处显示特异性很好,该方法对副溶血性弧菌基因组DNA的检测限为7.5pg,对模拟食品样品中的副溶血性弧菌的检测限为200 CFU/mL。同时运用我们建立的成熟的多重PCR技术对食源性致病菌—大肠杆菌O157和单核细胞增生李斯特菌进行了四重PCR扩增检测,结果表明我们建立的四重PCR技术能同时高特异性地检测出大肠杆菌O157和单核细胞增生李斯特菌。通过对副溶血性弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的16S rDNA全序列进行软件比对,寻找四种弧菌的16S rDNA的差异序列,针对其序列差异很小的特点在恒定区设计了一对通用性引物,并在正反向都标记了荧光。在可变区设计了4条特异性寡核苷酸探针,建立四种弧菌的芯片检测方法,通过40株菌对该方法进行了评价,结果显示该芯片能成功将四种弧菌进行快速检测区分,且特异性强。本研究建立了副溶血性弧菌的基于ERIC-PCR的基因分型方法和常见致病性弧菌的基因芯片检测技术,能够为副溶血性弧菌以及其它弧菌感染的诊断与预防提供可靠的技术手段,为保障食品安全提供了又一道屏障。