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樟科Lauraceae木材解剖结构相似,传统形态解剖学方法很难做出准确鉴定,基于分子标记的树种鉴定技术准确而且高效。本研究通过增加木粉质量与DNA缓冲液体积比、温浴时间等改良木质部基因组DNA提取;用改良CTAB-SDS法、CTAB法和试剂盒法提取樟科木质部DNA,筛选了木质部DNA提取方法,初步建立楠属木材DNA提取技术体系;利用ISSR和RAPD技术对樟科16种192株木质部DNA进行扩增,构建多态性鉴别图谱,比较两分子标记差别;DNA条形码对叶绿体基因psb A-trnH间隔区DNA克隆测序,通过序列差异区别16树种,构建系统进化树。具体结果如下:(1)通过增加木粉质量与DNA缓冲液体积比、温浴时间,改变缓冲液成分等参数,将DNA样品OD260/280值从1.1-1.5提升到1.8-2.0,提高了DNA纯度。(2)3种方法提取的DNA质量差别明显,改良CTAB-SDS法最适合提取楠属木质部DNA。DNA浓度:改良CTAB-SDS法最高、试剂盒法最低;DNA纯度:改良CTAB-SDS法和CTAB法提取的DNA样品纯度高,OD260/值为1.7-2.0,满足扩增要求,试剂盒法提取的DNA样品OD260/280大于2,不满足扩增要求。(3)序列扩增筛选6条稳定、条带清晰且多态性好的ISSR引物(815、825、834、840、848和843),确定其最佳退火温度分别是56℃、54℃、54℃、54℃、56℃和54℃。6条引物扩增共获得96条条带,长度为100bp-2000bp,86条具多态性,多态性比率为89.6%,6条引物的多态率为80%(引物825)-94.4%(引物843)。引物815、825、848和843构建的指纹图谱可区分16个树种,引物840构建的指纹图谱不能有效区分滇润楠和龙眼润楠、浙江樟和香樟、黑壳楠和江浙钓樟,引物834不能有效区分山胡椒和狭叶山胡椒,这2个引物的组合可区分16个树种。(4)序列扩增筛选8条稳定、条带清晰且多态性好的RAPD引物(S22、S91、S35、S150、S221、S66、S85和S97),确定其最佳退火温度都是38℃。8条引物共获得165条条带,长度为100bp-2000bp,153条具多态性,多态性比率为92.7%,8条引物的多态率为83.3%(引物S221)-100%(引物S91)。每条引物S22、S91、S35、S150、S221、S66、S85和S97构建的指纹图谱可将16个树种完全区分。(5)ISSR和RAPD分子标记重复性好,稳定可靠,但多态性与检测水平不同,RAPD分子标记的多态性高于ISSR分子标记,说明樟科树种存在丰富的遗传多样性。因此,将这2种分子标记结合使用会使树种鉴别结果更加准确全面。(6)樟科叶绿体DNA psb A-trnH基因区域的特异性引物序列为:psb A:GTTATGCA TGAACGTAATGCTC;trnH:CGCGCATGGTGGATTCACAATCC,最佳退火温度为57℃,PCR扩增率为100%,目的片段长度为530bp。(7)樟科树种psb A-trnH基因区域序列的碱基差异可区分16个树种,构建的系统进化树将樟科5属16种聚为5类,与传统解剖学分类结果一致。