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本实验通过补骨脂素联合A波段紫外线(psoralen combined with A-band ultraviolet,PUVA)亦称体外光化学疗法(extracorporeal photopheresis,ECP)诱导人脾淋巴细胞(spleen lymphocytes,SP)凋亡,再将未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDC)与凋亡的脾淋巴细胞共培养,诱导生成新型的树突状细胞,称之为体外光化学治疗性树突状细胞(extracorporeal photochemotherapic dendritic cells,ecpDC)。探讨ecpDC表型、功能及对T细胞增殖影响,并探讨ecpDC是否可以抵抗脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)介导的树突细胞(dendritic cells,DC)成熟作用,进而研究ecp DC是否适用于人体内发挥免疫耐受功能,为ecpDC应用于肝移植患者体内诱导免疫耐受提供理论支持及实验依据。首先分离人外周血单个核细胞(Human peripheral blood mononuclear cells,PBMC),利用白介素-4重组人粒细(recombinant human interleukin 4,rhIL-4)、重组人粒细细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rhGM-CSF)诱导生成DC。PUVA方法得到的人脾脏淋巴细胞(PUVA-SP),并进行凋亡率检测。将imDC与PUVA-SP共培养得到体外光化学治疗性树突状细胞(ecpDC)。分别将PUVA-SP、SP与imDC共培养,收获ecpDC和SPDC。收集imDC、ecpDC并加入100ng/mL的LPS培养1 d,分别得到LPS刺激的imDC和LPS刺激的ecpDC,即imDC+LPS组,ecpDC+LPS组。收集各组细胞,检测其表面抗体CD11c、CD83、CD86的表达情况。获取上述细胞上清,ELISA检测其IL-10和IL-12细胞因子量。通过混合淋巴细胞培养检测imDC、DC、ecpDC对同基因T细胞的增殖作用。结果发现:1、经PUVA处理后细胞总凋亡率为(98.59±1.35)%,对照组为(3.64±0.73)%,而PUVA处理组早期凋亡率为(94.21±3.75)%,明显高于对照组(P<0.01)。2、SPDC组表面分子CD83、CD86的阳性表达率为(45.86±4.86)%、(42.47±0.76)%,较imDC组的表达率(15.06±0.59)%、(15.19±1.83)%有显著差异(P<0.01)。ecpDC组表面分子CD83、CD86的阳性表达率为(22.83±5.26)%、(22.06±4.37)%与im DC组CD83、CD86的表达率(15.06±0.59)%、(15.19±1.83)%相近(P>0.05),而表达率较DC组CD83、CD86的表达率(99.79±0.36)%、(99.85±0.19)%低(P<0.01)。3、imDC组细胞培养上清液中IL-12的浓度为(147.52±6.42)pg/ml,高于ecpDC组中IL-12浓度(134.92±13.54)pg/ml(P<0.05),而明显低于DC组(326.86±7.58)pg/ml(P<0.01)。imDC组细胞上清中IL-10的浓度为(51.66±5.72)pg/ml,较ecpDC组中IL-10浓度(172.61±12.12)pg/ml有显著差异(P<0.01),并且DC组细胞上清中IL-10的浓度为(121.19±10.62)pg/ml,明显较ecpDC组中IL-10浓度(172.61±12.12)pg/ml低(P<0.01)。4、imDC+LPS组CD83、CD86表达率分别为(99.79±0.36)%、(99.85±0.19)%,明显高于ecpDC+LPS组CD83、CD86表达率为(35.15±5.40)%、(32.66±2.66)%(P<0.01)。5、imDC组细胞培养上清液中IL-10的浓度为(51.66±5.72)pg/ml,低于ecpDC组中IL-10浓度(172.61±12.12)pg/ml(P<0.01),imDC+LPS组IL-10的浓度为(121.19±10.62)pg/ml,低于ecpDC+LPS组IL-10浓度(316.09±30.91)pg/ml(P<0.01)。5、imDC组刺激指数为1.817±0.094,DC组刺激指数为3.460±0.071,ecpDC组刺激指数为1.422±0.060。与imDC组相比,DC组细胞可显著刺激T细胞增殖,两者具有显著统计学差异(P<0.01)与imDC组相比,ecpDC组细胞可显著抑制T细胞增殖,两者具有显著统计学差异(P<0.01)。通过上述研究结果我们可以得出以下结论,首先本实验利用体外光化学疗法诱导早期凋亡的脾淋巴细胞,为该研究领域提供了新方法,其较其他方法具有便于操作、安全性高等特点。其次imDC细胞吞噬凋亡的脾淋巴细胞的方法得到的新型DC细胞,即ecpDC,表达不成熟表型并且可抑制受者T淋巴细胞增殖反应,证实了ecpDC有与Dreg相似的负向免疫调控作用。最后ecpDC与imDC功能不同,ecpDC可抵抗LPS介导的刺激树突细胞成熟的作用。因此可用于体内诱导免疫耐受而不易被激活为成熟DC细胞。更适合应用于人体内用于诱导免疫耐受。