流式细胞术检测无镍奥氏体不锈钢对L929细胞凋亡的影响

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目的金属合金作为口腔修复材料应用于人体内,在人体生理环境中使用,对生命有机体会产生一定的作用和影响。生物相容性评价是研究医用金属材料生物性能的重要内容之一,目前新材料在用于人体之前都要求必须经过全面的生物相容性检测。无镍奥氏体不锈钢(BIOSSN4)是中科院金属研究所研制的一种新型的医用金属材料,这种材料优良的机械性能已经通过实验得到验证,但其生物相容性还需要进一步的研究。本实验就是从生物学角度,通过细胞培养及流式细胞仪检测,来了解无镍奥氏体不锈钢和其他4种医学常用的金属合金对L929细胞凋亡的影响,通过比较,进而评价一下无镍奥氏体不锈钢的生物相容性。材料与方法1、细胞培养小鼠成纤维细胞L929用含10%胎牛血清的RPMI1640细胞培养基在37℃、5%CO2的培养箱中培养并传代。2、流式细胞仪检测细胞在凋亡不同阶段的凋亡数量将5种金属合金(无镍奥氏体不锈刚、317L奥氏体不锈钢金合金、钻铬合金、镍铬合金、金合金)及阴性对照组的浸提液与L929细胞联合培养24、48小时后分别进行EGFP, PI双染色,然后通过流式细胞仪检测不同实验组细胞在凋亡不同时期的凋亡率。3、荧光显微镜下观察凋亡细胞滴一滴上述各组染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞,分别于荧光显微镜下观察Annexin V-EGFP荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。结果实验组细胞经AnnexinV-EGFP和PI双染色后,荧光显微镜观察可见细胞在凋亡不同时期的形态变化。流式细胞仪检测结果表明各实验组引起的细胞凋亡率是不同的。其中金合金组细胞凋亡率最低并且接近阴性对照组,无镍奥氏体不锈钢组引起的细胞凋亡率与金合金组较接近,其它金属合金凋亡率均高于金合金组,其中镍铬合金引起的凋亡率最高且远高于金合金组,其凋亡率由低到高的顺序为:金合金<无镍奥氏体不锈钢<钴铬合金<317L奥氏体不锈钢<镍铬合金。结论1、各实验组生物相容性由好到差的顺序依次为:金合金、无镍奥氏体不锈钢、钴铬合金、317L奥氏体不锈钢、镍铬合金。2、无镍奥氏体不锈钢可考虑应用于临床。
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