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目的:心血管疾病严重危害人们的身心健康,血管内膜增生伴随心血管疾病的发生发展,是其重要的病理基础,防治血管内膜增生已成为治疗心血管疾病的热点及难点。田黄片(THP)是郭姣教授根据多年临床经验总结出的方药,其具有化痰祛瘀解毒的功效,本实验通过构建兔血管内皮损伤后内膜增生模型,探讨THP对血管内膜增生的作用及其抗氧化机制研究,为临床治疗血管内膜增生提供新的治疗手段及思路。方法:将28只3-4月龄雄性新西兰白兔适应性喂养1周后随机分为对照组(7只)和手术组(21只),对照组普通饲料喂养8周,期间未做任何手术处理;手术组在数字减影X射线下行腹主动脉球囊损伤术,术后喂以高脂饲料4周,再次行球囊损伤术建立血管内膜增生模型,术后按随机数字法分为模型组、THP组和阿托伐他汀组,每组各7只,4周后全部处死取腹主动脉。1、应用血管造影机自带的仪器分析各组腹主动脉的病变点直径相对血管腔参考直径的比例(%MLD)及病变点面积相对血管腔参考面积的比例(%MLA),选取腹主动脉行病理学检验,并计算血管的内膜厚度及内膜/中膜厚度。2、蛋白质印迹法(Western blotting)检测腹主动脉组织的还原型烟酸胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况。3、酶联免疫吸附法(ELASA)检测血清中内皮素1(ET-1)、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、血小板内皮粘附分子1(PECAM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)。4、血清中的血糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)采用全自动生化仪检测;采用可见光法检测过氧化氢酶(CAT)活力,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA),用DTNB法定量测定谷胱甘肽过氧化物酶(GHS-Px)活力,用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)。结果:1、与第一次造影相比,模型组第二次的造影指标%MLD、%MLA明显升高(P<0.05),第三次的造影指标%MLD、%MLA较第二次更高(P<0.05)。腹主动脉组织病理检查发现,与对照组相比,模型组的内膜厚度及内膜/中膜厚度明显升高(P<0.05),模型组的腹主动脉形成了明显的内膜增生。2、普通饲料喂养4周后,与对照组相比,模型组腹主动脉的%MLD、%MLA、内膜厚度、内膜/中膜厚度升高(P<0.05)。腹主动脉病理观察发现,对照组内膜无增厚,内皮细胞排列整齐,无炎症细胞侵入,平滑肌细胞无迁移;模型组内膜明显增厚,大量炎症细胞侵入,平滑肌细胞大量向内膜迁移;THP组与阿托伐他汀组的内膜增厚明显减轻,内膜表面较平整,内皮细胞下的炎症细胞侵入和平滑肌细胞迁移明显减少。与模型组相比,THP组与阿托伐他汀组腹主动脉的%MLD、%MLA、内膜厚度及内膜/中膜厚度显著降低(P<0.05)。THP组与阿托伐他汀组相比,差异无统计学意义。THP与阿托伐他汀均可以改善腹主动脉的内膜增生现象。3、与对照组相比,模型组出现明显的高糖高脂血症,GLU、TC、TG、HDL、LDL明显升高(P<0.05)。与模型组相比,阿托伐他汀组血清中的GLU、TC、TG、LDL 水平显著降低(P<0.05),但HDL的差异无统计学意义(P>0.05);THP组的HDL显著升高,TC、LDL的水平明显下降(P<0.05)。THP与阿托伐他汀都可以降低兔血管内皮损伤后内膜增生模型的血脂水平。4、模型组血清中的抗氧化酶SOD、CAT、GHS-Px明显低于对照组,而血清中的MDA及腹主动脉氧化酶NOX1、NOX4的表达明显高于对照组(P<0.05),氧化应激状态增强。和模型组相比,THP组与阿托伐他汀组血清中的抗氧化酶SOD、CAT、GHS-Px的活性升高,氧化脂质产物MDA的含量降低,同时腹主动脉组织的氧化酶NOX1、NOX4的表达下降(P<0.05),改善血管的氧化应激状态。且THP升高CAT,降低MDA、NOX1的表达优于阿托伐他汀(P<0.05)。5、与对照组相比,模型组的内皮功能受损,内皮细胞分泌的NO减少,ET-1增多,且腹主动脉eNOS的表达明显下降(P<0.05)。与模型组比,THP组和阿托伐他汀组的NO、eNOS升高,ET-1降低(P<0.05),改善血管的内皮功能。6、与对照组比,模型组的OX-LDL、PECAM-1、VEGF上升明显(P<0.05),LOX-1的差异无统计学意义(P>0.05)。给THP后,可以降低VEGF的表达(P<0.05),但是对OX-LDL、LOX-1、PECAM-1的作用,无统计学意义(P>0.05)。结论:1、成功建立兔血管内皮损伤后内膜增生模型,此模型的氧化应激状态增强、内皮功能受损,并形成明显的高糖高脂血症。2、THP可以抑制血管内皮损伤后的内膜增生,可能是通过降低血脂,改善血管的氧化应激状况,促进NO的生成,进一步提高血管的内皮功能而发挥化痰祛瘀解毒作用,改善血管的内膜增生。