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目的：
研究通过RNA干扰技术阻断外周单核细胞来源的树突细胞(DC)内的Smad3，并在转化生长因子β1(TGF-β1)作用下对DC的成熟和免疫抑制作用的影响。
通过siSmad3转染DC，并且在外源性TGF-β1的作用下，观察DC的表型及分泌因子变化情况，探讨在阻断TGF-β1通路下，DC的免疫学变化。
通过siSmad3转染DC，并且在外源性TGF-β1的作用下，检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。
方法：
针对设计Smad3特异性小干扰RNA(siRNA)，利用RNAiMAX转染DC，并用RT-PCR和Westen blot检测DC中Smad3沉默效果。
流式细胞仪技术检测各组DC表面成熟因子的变化。
ELISA检测各组DC分泌白细胞介素12(IL-12)的水平。
CCK-8法检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。
结果：
Smad3siRNA转染DC
通过荧光显微镜观察发现，Smad3 siRNA转染DC，48 h时转染细胞效率达80％。
转染Smad3siRNA后DC中Smad3的变化：
Smad3siRNA转染DC后，经RT-PCR检测，Smad3-siRNA DC组表达Smad3mRNA表达水平(空)白DC组和阴性对照siRNA DC均明显下降，统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。经Westen blot检测，Smad3-siRNA DC组表达Smad蛋白表达水平较空白DC组和阴性对照siRNA DC均明显下降，统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。
DC的表型变化：
在外源性添加TGF-β1后，Control-DC组DC表面成熟标志CD80、CD83、CD86及HLA-DR的表达明显高于TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-NegtivesiRNA-DC组，统计学分析有统计学差异（P＜0.05）。经Smad3siRNA转染DC后，TGF-β1-Smad3siRNA-DC组表面成熟标志CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表达明显高于TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negtive siRNA-DC组，统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。
DC分泌细胞因子的情况：
双抗体夹心ELISA检测培养上清结果显示，在外源性添加TGF-β1后，Control-DC组培养上清中IL-12的含量明显高于TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negtive siRNA-DC组，统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。
经Smad3 siRNA转染DC后，TGF-β1-Control-DC组与TGF-β1-NegtivesiRNA-DC组的差异无统计学差异(P＞0.05)。TGF-β1-Smad3siRNA-DC组的IL-12分泌含量明显高于TGF-β1-Control-DC组与TGF-β1-Negtive siRNA-DC组，经统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。
T淋巴细胞增殖反应：
CCK-8法检测各组T细胞增殖结果显示，在外源性添加TGF-β1后，Control-DC组和较TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negtive siRNA-DC组强，统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。
经Smad3siRNA转染DC，TGF-β1-Smad3siRNA-DC组DC刺激T细胞能力均较TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negtive siRNA-DC组强，统计学分析有统计学差异(P＜0.05)。
结论：
通过Smad3siRNA转染DC，Smad3 mRNA水平明显下调，同时Smad3的蛋白表达水平显著受抑制。
Smad3siRNA转染DC，相比较未转染Smad3siRNA的DC，同样在外源性TGF-31的作用下，可上调DC表面成熟分子表达，促进细胞因子的分泌，并有效刺激异体T淋巴细胞的增殖。
通过小干扰RNA沉默DC中Smad3，阻断Smad3介导TGF-β1的传导通路，可以降低TGF-β1对DC成熟和免疫活性的影响。