枯草芽孢杆菌作为一种绿色健康的微生态制剂,具有调节动物肠道平衡、促进营养吸收、提高免疫能力等功能。它是抗生素的理想替代品之一,在禽畜养殖中已有广泛应用。本研究旨在将发现的抗菌蛋白基因成功构建到枯草芽孢杆菌益生菌中表达获得LW1工业生产菌株,探索LW1生产菌株的最佳培养条件,为后续深入研究其抑菌功能以及工业化生产提供参考。本实验利用基因工程手段成功构建了肠道致病菌抗菌蛋白基因工程生产菌株,并将该菌命名为枯草芽孢杆菌LW1。建立小鼠攻毒模型,初步探索肠道益生菌及抗菌蛋白的功能。通过用肠道益生菌、LW1以及抗菌蛋白对小鼠进行免疫,进行了肠道致病菌抑制试验比对,并在不同程度上降低了小鼠粪便及肠道内大肠杆菌数。对LW1进行发酵培养基优化、发酵条件的优化。通过单因素实验和正交实验,确定LW1的培养基最优配方:蔗糖1.5%、酵母浸粉0.5%以及氯化镁0.6%。最适发酵条件:培养温度为35℃,初始pH为7.2,接种量为10%,装液量为20 mL/250 mL。利用5 L发酵罐进行基础发酵条件的探索。通过单因素实验,确定了肠道益生菌最佳工业氮源为黄豆饼粉。以1.5%的蔗糖+玉米淀粉(1:1)为碳源,1.5%酵母浸粉+黄豆饼粉(1:1)为氮源,0.9%氯化镁+磷酸氢二钾+磷酸二氢钾(1:1:1)为无机盐,设定不同的工艺参数,结果表明最佳发酵温度为30℃~35℃,最适初始pH为7.0~7.2,搅拌转速为300 r/min。