向日葵茎芯多糖的提取纯化与活性评价

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:bonkoliu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
向日葵(Helianthus annuus L.)别名葵花,据文献记载向日葵的茎、叶、籽、盘、根均有较高的药用价值。特别是,向日葵茎芯的水提液在临床上有抗肿瘤的作用。在寻找向日葵茎芯中具有抗肿瘤活性的物质过程中,多糖被筛选了出来。本文首次对其抗肿瘤转移作用机制进行了研究,并对其结构进行了初步解析。主要研究结果如下:1.采用水提醇沉法对向日葵茎芯多糖进行了提取,利用单因素实验得到最佳提取条件为:浸提次数为2次,原料颗粒的大小(目数)为6080目,料液比为1:50,浸提时间为3.0 h,浸提温度为90 oC,在该条件下,向日葵茎芯多糖的提取得率为6.56%,多糖的含量为266.03 mg/g。2.提取所得粗多糖利用Sevag法除去蛋白、活性炭法除去色素后,利用DEAE纤维素DE-52离子交换柱层析法进行分离纯化,得到四个多糖组分分别为HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3和HALWP-4,其得率分别为3.03%、4.19%、1.82%和0.96%。经紫外光谱全波长扫描分析显示HALWP-1、HALWP-2和HALWP-3几乎不含有核酸和蛋白质,HALWP-4可能含有少量蛋白或有蛋白结构,可能为糖蛋白或氨基糖。经红外光谱检测显示这四种组分均有多糖的特征性基团,推测有O-H、C-H、C=O、C-O和糖醛酸,推测这四种多糖组分可能为β-构型的吡喃糖。经高效凝胶排阻色谱检测,HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3和HALWP-4的平均分子量分别为3.82×105,2.98×105,3.36×105,4.72×105 Da。3.采用MTT法研究向日葵茎芯多糖的体外抗肿瘤活性:向日葵茎芯多糖对人类胃癌细胞SGC-7901的IC50值为4.201±0.083 mg/mL;对人类结肠癌细胞HCT-8的IC50值为5.843±0.069 mg/m L;对人类口腔上皮癌细胞KB的IC50值为3.016±0.078 mg/mL,这些数据表明向日葵茎芯多糖体外抗肿瘤活性较弱,不足以解释其临床上较强的抗肿瘤活性。4.采用昆明小鼠建立S180原位肿瘤模型对向日葵茎芯多糖的体内抗原位肿瘤活性进行研究,研究结果表明空白组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺:25 mg/kg)和多糖给药组(向日葵茎芯多糖:250 mg/kg)小鼠的平均体重分别为36.17±1.26 g、33.42±1.33 g和35.06±1.19 g;阳性对照组的抑瘤率为63.73%,多糖给药组的抑瘤率为51.16%;三组的平均生存时间分别为49.58 d、54.0 d和57.83 d,表明向日葵茎芯多糖的毒副作用较小,能够明显延长小鼠的生存时间,具有较强的抗S180肿瘤的活性。5.采用C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌肿瘤转移模型,对向日葵茎芯多糖及其不同组分的体内抗肿瘤转移活性进行研究。研究结果表明,空白组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺:25 mg/kg)、向日葵茎芯多糖及其各组分(HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3、HALWP-4)给药组(给药剂量均为250 mg/kg)小鼠的平均体重依次为22.57±1.08 g、20.94±1.22 g、21.32±1.36 g、21.78±2.02 g、21.12±1.85 g、21.67±0.98 g、22.23±1.34 g;抑瘤率分别为61.32%、52.17%、48.45%、45.12%、56.86%、58.61%;各组平均生存时间分别为38.7 d、40.8 d、47.3 d、43.1 d、46.2 d、47.7 d、50.5d,表明向日葵茎芯多糖及其各组分的抗肿瘤效果与临床药物环磷酰胺较为相似,且毒副作用较小,能够明显延长C57BL/6小鼠的生存时间,具有较强的抗Lewis肺癌肿瘤转移的活性。6.采用C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌肿瘤转移模型,对向日葵茎芯多糖及其组分的免疫增强活性进行研究。研究结果表明,空白组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺组:25 mg/kg)、向日葵茎芯多糖及其各组分(HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3、HALWP-4)给药组(给药剂量均为250 mg/kg)小鼠的脾指数分别为6.53±0.52 mg/g、6.07±0.49 mg/g、7.08±0.38 mg/g、6.91±0.56 mg/g、7.04±0.67 mg/g、7.13±0.52mg/g、7.33±0.43 mg/g;胸腺指数分别为1.28±0.33 mg/g、1.19±0.29 mg/g、1.42±0.42 mg/g、1.39±0.37 mg/g、1.35±0.42 mg/g、1.46±0.38 mg/g、1.52±0.42 mg/g。以上数据表明向日葵茎芯多糖及其不同组分能够刺激宿主免疫系统,通过促进脾和胸腺细胞的增殖来提高宿主免疫功能,进而达到抗肿瘤的作用。7.采用ELISA试剂盒检测向日葵茎芯多糖及其不同组分对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的量的影响。研究结果显示空白组、向日葵茎芯多糖及其不同组分(HALWP-1、HALWP-2、HALWP-3、HALWP-4)给药组(50μg/m L)处理后的RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α的量依次为179.26±10.52 pg/mL、166.70±9.78pg/m L、170.79±10.36 pg/mL、175.06±10.56 pg/mL、173.51±9.33 pg/mL、168.24±9.82 pg/mL;体内实验表明Lewis肺癌荷瘤C57BL/6小鼠血清中TNF-α的量依次为163.23±8.26 pg/m L、149.53±9.12 pg/m L、143.18±8.52 pg/mL、148.08±9.23 pg/m L、155.94±8.97 pg/mL、148.25±7.98 pg/mL。以上研究结果表明向日葵茎芯多糖及其不同组分均能不同程度抑制巨噬细胞释放TNF-α。其抗肿瘤转移机制可能是向日葵茎芯多糖及其不同组分能够与肿瘤细胞释放的多功能糖蛋白竞争和巨噬细胞的TLR2受体结合,从而干扰了巨噬细胞释放TNF-α,进而抑制了肿瘤细胞的转移。以上研究结果为向日葵茎芯开发为低毒的抗肿瘤药物奠定了基础。
其他文献
本研究以22个品种的糯米为原料,分别制作汤圆和年糕这两种糯米制品。主要对糯米成分及理化性质进行了测定,探讨了其与汤圆和年糕这两种常见的糯米制品食用品质的相关性,通过主成分分析法得出了汤圆和年糕的综合品质评价模型,并运用聚类分析将糯米制品品质进行了分类以确定优质糯米原料,后通过逐步回归分析得出了糯米制品综合品质得分与原料品质特性之间的关系,筛选出了影响糯米制品综合品质的关键性指标。另外探讨了不同储藏
石蜡是一种常见且常用的相变材料,具有化学稳定性好、相变时体积变化量较小且价格便宜等优点,因而使用较广。但是石蜡是一级相变材料,在发生固-液相变时存在着液相的流动泄漏
学位
在完全分类了Lorentz空间形式中两个共形主曲率的类空超曲面情况下,本文研究了一类有三个共形主曲率的类空超曲面.第一章介绍了本文研究背景及研究内容.第二章介绍了伪黎曼子
新中国成立以来,中国的高等教育事业受到空前的重视。随着两次高校建设热潮的到来,国内的高校数量直线攀升,解决了大量学生的入学难题。但近年来,随着“环境育人”理念的兴起,这种粗放的建设模式的弊端逐渐显现。千篇一律的校园景观不仅失去了自身特色,也忽视了良好的人文环境对人才培养的积极作用。因此,本文的核心是从景观设计的角度出发,通过研究优化高校人文景观的可意象性的优化策略,为学生创造良好的校园环境,达到传
在基于时延测量的分布式水声定位系统中,其定位精度往往严重依赖于时延估计精度,且由于水声信道是时间散布快速衰落信道,具有时变、空变、多途、频散等不稳定性,造成中远程水
工具的功用性是指工具所能提供的行为可能,是工具的价值体现。工具功用性检测与标记属于物体识别领域,旨在感知工具部件的准确区域并进行深层认知。鉴于现有的功用性检测算法
随着电动汽车产业的快速发展和充电桩的大力建设,大量电动汽车的无序充电势必对配电网造成不利的影响。如何在满足用户充电需求的前提下制定合理有效的电动汽车有序充电策略,成为当今世界研究的热点问题。如何在满足电动汽车用户充电需求的同时有效规避大规模充电对电网造成的负面影响以实施有效的有序充电策略仍是一个亟待解决的问题。近年来,复杂网络理论被应用于电力网络的研究,并取得了很多积极结论。文中考虑现有电动汽车有
子流形几何的研究一直受到数学家和物理学家的关注,所研究的内容与理论物理、微分几何等密切相关,具有重要的理论意义.在爱因斯坦的广义相对论的影响和推动下,内积的正定性减
目前萨中油田大部分油井含水较高,注入水的无效循环日趋严重,封堵特高含水层或分层配产成为治理高含水油井、高效开发的重要手段。为了实现油井在生产过程中改变堵水层位及油