【摘 要】
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本文首先对限氮培养基在富氧环境下培养黄孢原毛平革菌同时合成木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的条件进行了研究,在此基础上研究了双酶的初步分离纯化、共固定化以及在手性合成
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本文首先对限氮培养基在富氧环境下培养黄孢原毛平革菌同时合成木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的条件进行了研究,在此基础上研究了双酶的初步分离纯化、共固定化以及在手性合成中的应用。 本文采用限氮培养基在富氧环境下培养黄孢原毛平革菌合成木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶,实验表明:葡萄糖和酒石酸铵分别为最佳碳、氮源;最佳碳源浓度为15g/L和10g/L时;最佳氮源浓度为0.2g/L和0.3g/L(分别对应于木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的合成);最佳维生素B1、Tween-80和苯甲醇浓度分别为3mg/L、0.05%和5.0mmol/L。最佳装液量为50ml/250ml三角瓶;两天后培养基的最佳倾液量为50%,最佳通氧频率为1次/天,最佳摇床转速为80rpm,最佳接种量为3×107/瓶,最佳温度为37℃。在最优培养条件下,木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶的酶活分别达到448.3U/L和27.34U/L。 采用先除多糖,再超滤浓缩,最后盐析的方法对木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶进行了初步的分离纯化。结果表明:1/3体积的冷丙酮和一次冻溶为最佳除多糖方法;超滤浓缩后的酶液在60%饱和硫酸铵浓度下的盐析效果最佳,木素过氧化物酶和乙二醛氧化酶均获得最高的比酶活,分别达6042.6U/g和513.63U/g。
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