番茄灰霉病是常见的对番茄危害较重的一种病害。化学防治番茄灰霉病易产生抗药性、农药残留及生态失衡等负作用。生物防治具有高效、零污染、不产生抗药性和预防和治理结合等优势,其中生物有机肥既可以增产,改善产品品质,又可以调节和改善土壤微生物的组成,进而在一定程度上减轻农作物病害的危害。筛选有效的番茄灰霉病拮抗菌,进而制备拮抗菌剂和生物有机肥均是利用生物技术防治番茄灰霉病的重要途径。因此,本试验通过对相关土壤微生物的分离纯化,筛选并鉴定对番茄灰霉病病原菌具有较好抑制作用的拮抗菌,并通过单因素和正交试验优化其固体发酵培养基及培养条件,研究拮抗菌菌剂的保存方式,还将拮抗菌与腐熟后的有机肥发酵制成生物有机肥,进而通过室内盆栽试验来研究其对番茄灰霉病的防治效果。1.土壤中番茄灰霉病拮抗菌的分离、筛选及鉴定。为了获得对番茄灰霉病有抑制效果的拮抗菌并确定菌株的分类地位,以土壤为分离源,采用稀释涂平板及平板划线方法分离,平板对峙方法筛选,对所筛的菌株进行菌株形态鉴定和ITS区序列解析鉴定。结果表明,从土样中共分离出47株真菌,初筛得到27株真菌对番茄灰霉病原菌有拮抗作用,复筛得到一株对番茄灰霉病病原菌抑制率高达74.80%的菌株Z47,鉴定为草酸青霉(Penicillium oxalicum)。2.拮抗菌Z47固体发酵条件的优化及其菌剂保存方式的研究。为研究拮抗菌Z47固体发酵条件和菌剂保存方式,通过单因素和正交试验探索了其固体培养基、外加碳源、外加氮源、外加磷源、料水比、固料瓶装量、接种量、光照、发酵温度及时间对该菌产孢量的影响；并以湿样和烘干样在低温和室温条件下保存拮抗菌Z47菌剂,定期测定孢子数和有效活菌数。拮抗菌Z47的固体发酵优化条件为：固料瓶装量15 g/250mL三角瓶,稻壳粉与麸皮4：1混合,外加麦芽糖、硫酸铵和磷酸氢二钾的量分别为1.5%、2%和0.15%,料水比为1：0.6(g·mL-1),接种量为12.5%(mL.g-1),全黑暗培养,25℃～20℃-28℃下依次发酵2 d,持续发酵12 d,可获得高达5×109 CFU/g的产孢量。湿样5℃存放的拮抗菌Z47孢子存活率一直最高,但从拮抗菌Z47有效活菌数上看,40℃烘干样室温存放显著高于湿样5℃存放、湿样室温存放和40℃烘干样5℃存放,因此,拮抗菌Z47菌剂最佳的保存方式为40℃烘干后室温存放。3.拮抗菌Z47生物有机肥的制备及其盆栽应用研究。为了制备拮抗菌Z47生物有机肥并研究其对番茄灰霉病的生防效果和对土壤微生物的影响,将拮抗菌接种于腐熟蛋鸡粪有机肥中,二次发酵后应用于番茄盆栽试验,定期检测番茄灰霉病的发生情况和番茄根际土壤中微生物的变化,并在盆栽结束时,测定番茄的生物量。结果表明,拮抗菌Z47生物有机肥中有效活菌数达2×108 CFU/g以上,施用拈抗菌Z47生物有机肥(处理5)对番茄灰霉病的防效达到73.67%,显著高于拮抗菌Z47菌液处理(处理3)和普通有机肥处理(处理4)；处理5的番茄株高、茎粗、鲜重和干重也显著高于其它处理,表现出显著的促生效果：相对于其他处理,处理5使番茄根际土壤中细菌和真菌数量显著增加,灰霉病菌和放线菌数量显著下降,其中拮抗菌Z47数量也显著高于处理3。拮抗菌ZA7生物有机肥能有效改善番茄根际土壤微生物群落结组成,提高土壤微生态系统的稳定性和抑病性,从而提高土壤质量,起到防病促生的作用。