论文部分内容阅读
目的： 通过研究咪达唑仑对hERG(humanether-a-go-go-relatedgene)钾通道电流及动力学曲线的影响，探讨其致QT间期延长的作用机制，为指导临床用药提供理论依据。 方法： 采用脂质体瞬时转染的方法分别把野生型hERG(wildtypehERG，WT-hERG)、Y652和F656位点突变的hERG转染进人胚胎肾细胞(HumanEmbryonicKidney，HEK293)，然后应用全细胞膜片钳技术分别记录咪达唑仑对HEK293细胞上的hERG、Y652A-hERG和F656C-hERG钾电流及其动力学曲线的影响，并比较咪达唑仑对WT-hERG和突变hERG钾电流的作用。 结果： 1.咪达唑仑呈浓度依赖性直接抑制WT-hERG钾电流(IKr)，其对WT-hERG电流的半数最大抑制浓度IC50(half-maximumblockconcentrations)值为1.31±0.32μM，Hill系数:0.24±0.02。 2.咪达唑仑对WT-hERG钾通道的激活曲线无显著影响，但对失活曲线有影响。1μM的咪达唑仑加药前后半数激活电压V1/2由2.32±0.38mV变为-1.96±0.83mV，激活斜率k由11.87±0.33mV变为14.68±0.76mV，经统计学处理无显著性差异(P＞0.05，n=11)。但加入1μM的咪达唑仑使WT-hERG失活曲线左移:加药前后半数失活电压V1/2由-49.25±0.69mV变为-57.53±0.53mV，失活斜率k由19.66±0.61mV变为21.45±0.46mV，经统计学处理有显著性差异(P＜0.05，n=6)。 3.与WT-hERG相比，咪达唑仑对突变体Y652A-hERG及F656C-hERG钾通道的抑制作用减弱，尤其是F656C-hERG减弱更为显著。10μM咪达唑仑对突变体Y652A-hERG钾通道的抑制率为（27.2±3.8）％，而对WT-hERG的抑制率（60.3±6.4）％;同样的浓度其对突变体F656C-hERG钾通道抑制率（22.5±7.4）％，对WT-hERG的抑制率（67.1±6.9）％。由此可见，突变体Y652A-hERG及F656C-hERG削弱了咪达唑仑抑制WT-hERG钾通道的能力。 结论： 咪达唑仑呈浓度依赖性抑制HEK-293细胞上hERG钾通道电流，使其失活过程加快。F656C是咪达唑仑与hERG钾通道相互作用的重要位点。