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磷脂酶价格低廉、催化性能良好,尤其是Lecitase(?)Ultra(LU),是近年来研究和应用的热点酶之一。LU目前主要应用于植物油脱胶和磷脂改性。游离酶稳定性差,且不能重复利用;将LU固定化后可克服以上缺点。介孔分子筛SBA-15具有较大的比表面积,可以较好的负载酶,且孔道内丰富的硅羟基便于功能化修饰以改善其性能,是一种优良的载体。本论文将LU固定于不同基团修饰的SBA-15,研究了其酶学特性;并将其应用于甘油解反应制备甘油二酯(Diacylglycerol,DAG)及大豆毛油脱胶中,研究了固定化LU在两种体系的催化效果及重复利用性。主要研究成果如下:1、研究优化了 SBA-15负载LU的条件,得到优化后的负载条件为pH=6,酶蛋白浓度为200.80 μg/mL,吸附时间30min,在该负载条件下所得固定化酶SBA-15-LU的酶活为2177.78±101.84 U/g。2、采用常见的硅烷偶联剂对SBA-15进行有机修饰(R-SBA-15),然后再负载LU(R-SBA-15-LU)。发现N-氨乙基-γ-氨丙基、3-(异丁烯酰氧)丙基、3-氨丙基、异氰酸丙基等疏水性适中的基团有利于脂肪酶活性的提高,其中,(?)以及(?)的酶活分别为 3555.56±900.21、3444.44±346.41、4777.78±115.47、3111.11±443.89 U/g。XPS、XRD 及 FT-IR 等结构表征表明,有机功能化及LU酶已成功修饰和负载在SBA-15上,且功能化修饰和LU的负载不会改变SBA-15的有序六方孔结构。3、固定化LU适于在无溶剂体系中催化甘油解,叔戊醇溶剂削弱了其甘油解反应活性。SBA-15-LU催化甘油解,温度为60℃,反应8 h后,DAG 含量高达 52.43±1.64%,TAG 转化率达 89.89±1.14%;反应12 h后,TAG转化率达92.19±0.89%。相比于SBA-15-LU(DAG/MAG为1.40±0.06),(?)催化甘油解反应对 DAG有一定的选择性,DAG/MAG分别为2.86±0.99和2.89±0.19。对(?)催化甘油解反应条件进行优化,优化结果为:加酶量为反应底物的6.75 wt%、温度为30℃、反应时间为4h。此条件下TAG转化率和DAG含量分别为90.92±0.08%和55.20±0.12%。此外,反应进程表明,反应在60℃比 30℃更快达到平衡,但是30℃反应时TAG转化率更高。尽管SBA-15-LU催化甘油解可得到较高含量的DAG,但是其重复利用性差,重复使用五次后,酶活是初始的9.79±6.17%;而(?)重复5次后,酶活能保持其初始酶活的83.91 ±22.25%。4、研究了 LU的水解磷脂酶活,结果显示,游离LU和SBA-15-LU的酶活分别为3581.67±75.35 U/mL和1852.50±297.83 U/g。有机功能修饰后的R-SBA-15-LU,如N-氨乙基-γ-氨丙基、3-氨丙基、苯胺甲基、3-缩水甘油基氧基丙基、3-脲丙基及长碳链等基团修饰后所得固定化LU具有较高的酶活,其中,(?)(?)的酶活分别为3840.00±511.72、3825.00±435.97、3981.67±319.34、4554.17±164.04 和3702.50±5.00 U/g。将所得固定化LU应用于大豆毛油脱胶,在毛油磷含量较低为 121.15 mg/kg 时,(?)以及(?)经过五次重复使用后,相对活性仍维持在100%左右,且脱胶油磷含量小于10 mg/kg,可达到进一步精炼的标准,说明固定化LU用于磷含量较低的毛油脱胶,脱胶效果较好并可以重复利用。5、(?)同时具有较高的磷脂酶活性和脂肪酶活性,并且在催化甘油解反应和脱胶反应中均得到较好的效果,以及重复利用效果,因此(?)是各方面性能优良的固定化酶。