目的在厌氧环境下,肉毒梭状芽孢杆菌能够分泌一种毒素,称作肉毒神经毒素或肉毒毒素,该毒素的毒力作用极强,是目前自然界毒力作用最强的微生物毒素之一。肉毒中毒是由肉毒神经毒素引起神经肌肉潜在的致命性迟缓性麻痹,毒素主要累及神经肌肉接头前膜,临床上患者表现为全身多处骨骼肌麻痹的症状体征,病程中无发热及意识障碍。常见的中毒类型有食源性、创伤性及婴儿肉毒中毒。肉毒杆菌食物中毒是肉毒中毒中最常见的形式。近年来,随着人口流动、货物流通加快、食品流通渠道广等多因素影响,肉毒杆菌食物中毒患者逐渐呈现多省市、多地域、群体性、突发性等特点。本研究主要针对我院收治并确诊的中毒患者临床发病特点、首次入院实验室检查、诊治经过及治疗后指标等方面进行分析总结,探索我院收治中毒患者的临床特征与诊治经验,以期提高各级医疗机构肉毒杆菌食物中毒诊治水平和检出率。通过对我院2016年收治两例肉毒杆菌食物中毒患者剩余样本,综合多项实验室的检测方法、结果的分析,拟逐步探索适合临床疑似肉毒中毒患者检测需要的实验室手段,为今后开展疑似肉毒中毒病例临床初步检测、最终确诊检测提供参考。内容依据第14版《实用内科学》及《中毒急危重症诊断治疗学》肉毒杆菌食物中毒诊断标准,制定病例纳入及排除标准,收集所有入组患者一般情况,包括姓名、性别、年龄、籍贯、民族、发病季度及年份、中毒原因、是否群体发病、是否误诊、潜伏期、发病至首诊时间、入院时间、住院时间、首次入院根据病情做中毒严重程度评分(poisoning severity score,PSS)、毒素型别鉴定、临床症状及体征、平均使用抗毒素数量、入院首次血常规、肝功、肾功和心肌酶、治疗前后生命体征及动脉血气分析。方法按照PSS、患者临床症状及体征,将所有入组患者分为轻度中毒组、中度中毒组、重度中毒组。整理分析入组中毒患者的一般资料及流行病学特点,包括病情分级、潜伏期、地区、季度、年份、中毒原因、误诊疾病、误诊科室及毒素型别等。轻度组、中度组及重度组中毒患者的年龄、性别、潜伏期、发病至首诊时间、平均使用抗毒素数量、住院时间及PSS、入院首次血常规、心肌酶、血生化(肝功、肾功)以及治疗前后生命体征及动脉血气分析进行比较,并总结其发病规律及救治经验。统计学方法:用SPSS 23.0统计软件进行数据录入及统计分析。计量资料用均数±标准差(sx±)描述,满足条件的组间比较采用单因素方差分析,否则用非参数检验,最后作两两比较。计数资料采用频数和率表示,组间比较采用c(17)或者Fisher精确概率法。p<0.05有统计学差异。介绍2016年我院收治的疑似两名肉毒杆菌食物中毒患者所进食样本的检测分析方法及流程,此次检测展开多科室、多种检测手段相结合的协作模式,经过初步肉毒快速检测、可疑样本厌氧培养、小鼠动物实验、肉毒杆菌核酸检测等方法,最终确诊病原体及毒素型别。结果1、符合条件肉毒杆菌食物中毒患者共53例,根据患者临床症状及PSS,轻度中毒组患者33例,中度中毒组患者13例,重度中毒组患者7例。一般资料如下特点:女性居多,年龄分布跨度较大,群体发病多见,多以家庭为单元,发病患者主要集中在河北、北京及河南三省,夏季和秋季为主要发病季节,自制发酵制品仍然是首位中毒原因,平均潜伏期51h,轻度中毒人数及A型毒素中毒患者居多。不同程度肉毒中毒患者,肉毒抗毒素使用数量有明显差异,病情处于中度及重度中毒患者,病程中肉毒抗毒素使用数量远远超过轻度中毒患者。部分患者被误诊为重症肌无力(myastheniagravis,MG)、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)、急性胃肠炎等。2、纳入本研究的中毒患者中,临床症状出现频率最高的是头晕、全身乏力、视物模糊。首发症状前三位的是:头晕、头痛、全身乏力,首发症状无特殊性,因此,容易导致部分患者的首诊医生误诊,最后确诊有赖于多学科合作。3、不同程度中毒患者,首次入院WBC、N、ALB有统计学差异,两两比较结果显示,重度中毒组的WBC、N及ALB与轻度中毒患者相比有统计学差异。4、不同程度中毒患者,除了PCO2,治疗前中毒患者生命体征及动脉血气分析各项指标有统计学差异,其中重度中毒组患者的R、HR、pH、FiO2、PO2及SaO2与轻度中毒组患者相比有差异性。治疗后中毒患者PO2有统计学差异。5、针对两例疑似肉毒杆菌食物中毒患者残余的样本进行的检测,肉毒免疫胶体金快速检测显示肉毒毒素检出阳性。小鼠生物试验分为检出试验、确证试验、定型试验,检出试验结果初步怀疑样品中可能存在肉毒毒素,确诊试验进一步明确样品中存在肉毒毒素,定型试验结果显示毒素为A型。三价混合型抗毒素及单价A型肉毒抗毒素对小鼠有保护作用。这一结果指导我们临床抗毒素的特异应用,最终临床疑似肉毒中毒患者在我院确诊。6、此次疑似肉毒杆菌食物中毒病原体核酸检测技术包括普通PCR、荧光定量PCR及全基因测序技术,三者的检测从分子生物学不同角度,再次证实此次致病菌为肉毒梭状芽孢杆菌,血清型别为A型。结论1、肉毒杆菌食物中毒在低发地区仍然以散发为主,近年来北京周边省市小范围有群体流行态势,并且病例数呈逐年上升趋势。2、肉毒杆菌食物中毒患者初期症状、体征缺乏特异性,给首诊医生带来很大困惑,部分首诊患者存在误诊、延误诊治等情况,因此需要加强相关科室对此类疾病的认识,尽可能较少误诊的发生。3、肉毒杆菌食物中毒患者首次入院实验室检查对后续病情评估有一定参考价值。4、PSS和动脉血气分析可以有效对肉毒杆菌食物中毒患者进行实时评估、病情监测,便于掌握患者动态病情。5、针对疑似肉毒中毒,即时检验(point-of-care testing,POCT)能给临床医生提供初步判断,有必要在临床推广。虽然小鼠生物试验耗时,仍然是肉毒检测金标准试验,尚不能被其它检测手段替代。肉毒杆菌核酸检测技术与临床的结合,以及在临床的应用仍需进一步探索。