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目的:探究成纤维生长因子18(Fibroblast growth factor18,FGF18)对软骨细胞分化的影响,以及其对内侧半月板不稳定模型(Destabilization of the medial meniscus,DMM)小鼠骨关节炎的治疗效果,为利用FGF18治疗骨关节炎提供实验依据。方法:利用PCR的方法获取FGF18全长基因片段,再用AgeⅠ和NheⅠ酶切目的基因和pYr-1.1载体,连接后得到pYr-FGF18质粒。通过LR体外同源重组,将pYr-FGF18的表达框转移到pAd/PL-DEST腺病毒表达载体上,得到pAd/PL-FGF18质粒。用PacⅠ酶切pAd/PLFGF18,将线性化的质粒转染至HEK293A细胞中包装得到Ad-FGF18重组腺病毒载体,并进行扩增、纯化。Ad-GFP腺病毒也用同样的方法得到。用Ad-FGF18腺病毒感染HEK293A细胞并鉴定感染后的细胞中FGF18基因是否过表达。用Ad-FGF18腺病毒感染软骨细胞,观察其对软骨细胞分化的影响。对小鼠施行DMM手术,术后第2周开始关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒,持续6周,术后第8周处死。取小鼠腿部进行石蜡包埋,切片后进行SO染色,观察关节软骨的受损情况。通过免疫荧光法和免疫组化法染色观察小鼠关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒后FGF18在关节软骨处的过表达情况。利用免疫组化法染色观察关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒的小鼠关节软骨处骨关节炎分化标志物的表达情况。结果:经PCR扩增成功获得大小为624bp的FGF18目的基因片段。将FGF18目的基因与pYr-1.1载体连接得到pYr-FGF18腺病毒穿梭质粒,测序结果与FGF18在基因库中的序列一致。pYr-FGF18和pAd/PLDEST体外同源重组得到pAd/PL-FGF18,将线性化后的质粒转染至HEK293A细胞中包装腺病毒,几天后细胞出现CPE现象。收集病毒并使其感染HEK293A细胞后,HEK293A细胞在mRNA水平和蛋白质水平上均能过表达FGF18。Ad-FGF18感染软骨细胞后,软骨细胞中的FGF18表达量增高,同时软骨分化标志物II型胶原蛋白(Col2)、聚蛋白多糖(Aggrecan)和Sox9的表达量也增高。DMM小鼠关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒后,关节软骨处FGF18表达增高,与注射Ad-GFP腺病毒的小鼠相比,高表达FGF18的小鼠关节软骨处的损伤比较轻微。免疫组化结果显示,注射Ad-FGF18的小鼠关节处Col2和Aggrecan的表达增加,Adamts的表达明显降低,基质金属蛋白酶3(Matrix metalloproteinase 3,MMP3)和基质金属蛋白酶13(Matrix metalloproteinase 3,MMP13)的表达稍有降低。结论:1.成功构建重组Ad-FGF18腺病毒载体,并能在HEK293A细胞中表达。2.Ad-FGF18腺病毒能够促进软骨细胞的分化。3.DMM小鼠关节腔内注射Ad-FGF18腺病毒能够对关节炎起到一定的治疗作用。