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目的:1.检测瞬时受体阳离子通道(TRPC)在SGC-7901细胞上的表达,和EMT指标在对照组和TGF-β 1组中的变化。2.探讨TRPC调控Ras/Raf 1/ERK1/2信号通路,在SGC-7901细胞EMT中的作用。方法:1.运用qRT-PCR和Western blot技术,选择刺激SGC-7901细胞发生EMT的TGF-β1浓度及时间。2.采用免疫荧光技术检测TRPC家族成员,在SGC-7901细胞的表达情况;并选出在SGC-7901细胞中表达较高的TRPC亚型进行后续实验研究;同时观察EMT指标(E-cadherin,Vimentin和α-SMA)在对照组和TGF-β1组中的表达变化。3.RT-PCR和Western blot方法,检测给予TRPC抑制剂(SKF96365和2-APB)后,各组TRPC、EMT指标以及Ras/Raf1/ERK1/2信号通路主要分子的mRNA和蛋白的表达情况。4.RT-PCR和Western blot方法观察给予ERK抑制剂(PD98059和U0126)后,EMT指标及p-ERK1/2的表达变化。结果:1.RT-PCR 和 Western blot 结果发现:15 ng/ml TGF-β1 刺激 48 h 可以明显诱导SGC-7901细胞发生EMT。2.免疫荧光染色结果显示:TRPC1,TRPC3和TRPC6亚型在SGC-7901细胞中表达较高,而TRPC4和TRPC5则表达很低,且TRPC在胞膜和胞质中均有表达。所以,我们重点研究TRPC1、TRPC3和TRPC6这3种亚型。关于EMT指标的免疫荧光结果表明:与对照组相比,TGF-β1组中E-cadherin表达下降,Vimentin和α-SMA表达升高。3.RT-PCR 和 Western blot 方法,检测给予 TRPC 抑制剂(SKF96365 和 2-APB)后,各组TRPC、EMT指标以及Ras/Raf1/ERK1/2信号通路主要分子的mRNA和蛋白的表达情况,结果提示:和对照组比较,TGF-β1组中TRPC1、TRPC3、TRPC6的基因表达水平明显上升,有统计学差异,P<0.05;给予TRPC抑制剂后发现,与 TGF-β1 组相比,TGF-β1+SKF96365 和 TGF-β1+2-APB 组,TRPC1/3/6基因表达下调,差异有统计学意义,P<0.05。但是,TGF-β1+SKF936365 抑制剂组 TRPC1 的 mRNA 以及 TGF-β1+2-APB 组 TRPC6的mRNA表达无明显变化,差异无统计学意义,P>0.05。EMT指标结果发现:和对照组比,TGF-β1组的E-cadherin的基因表达下调,Vimentin和α-SMA表达升高,差异有统计学意义,P<0.01;TRPC抑制剂SKF96365和2-APB可以上调E-cadherin表达水平,而SKF96365并不能升高E-cadherin的mRNA表达水平;Vimentin和α-SMA表达降低,差异有统计学意义,P<0.05。另外,我们结果还发现,TGF-β1可以激活Ras/Raf1/ERK1/2信号通路,表现为Ras、Raf1和p-ERK1/2的表达升高,给予TRPC抑制剂(SKF96365和2-APB)干预后,可以抑制Ras/Raf1/ERK1/2信号转导,差异有统计学意义,P<0.01。4.RT-PCR 和 Western blot 方法,观察给予 ERK 抑制剂(PD98059 和 U0126)后EMT指标及p-ERK1/2的表达变化;结果提示:除了 PD98059不能升高E-cadherin的mRNA表达外,ERK抑制剂可以抑制TGF-β1诱导的SGC-7901细胞EMT现象的发生,差异有统计学意义,P<0.05。此外,ERK抑制剂可以下调磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白表达,差异有统计学意义,P<0.01。结论:TRPC抑制剂,通过阻断Ras/Raf1/ERK的信号转导,可以减弱TGF-β1刺激的SGC-7901细胞的EMT。