马红球菌流行病学调查及其分离株特性的初步研究

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马红球菌(Rhodococcus equi,R.equi)属于革兰氏阳性兼性胞内寄生菌,R.equi感染称马红球菌病,又称幼驹传染性支气管肺炎,以化脓性肺炎为主要临床症状,多发于1~6月龄马驹,呈世界范围分布,是引起马驹致病和死亡的一个重要因素,严重影响了育马业的发展并造成了较大的经济损失。R.equi作为一种人畜共患的病原菌,不仅威胁马匹的繁殖、马业的发展,还危及人类健康。但是,国内关于R.equi的流行性和细菌特征的研究甚少。因此,本研究通过对马场空气细菌群落组成和R.equi的季节性、以及全国九个城市马场土壤R.equi的流行病学调查,并对我国R.equi分离得到的R.equi菌株的理化、药敏特性及毒力特征进行分析,为我国R.equi防治提供必要的理论依据和参考。首先,本研究通过illumine-based的分析方法,对广州马场空气细菌群落组成和R.equi进行调查分析。采用ZYK-6六级筛孔空气采样器采集样本并进行DNA抽提,利用PCR扩增细菌16S rRNA条带计算各微生物的OTU(Operational taxonomic units,OTU)数值,通过对OTU数值进行分类学分析,并在genus(属)水平上统计各样本的群落组成。分析结果得到3月、6月和12月的空气样本分别属于不同聚类,3月和6月的空气样本微生物属于同一分支,而12月的则单独为一分支且12月的微生物多样性指数最高,微生物组成具有独特性。由此得出广东省马场空气细菌群落组成特点为:细菌群落12月丰度较高,且其组成与其它月份存在较大差异,尤其春夏应注意马场卫生、通风以防范疾病发生。而红球菌属OTU丰度差异分析结果得到6月红球菌属丰度高于其它季节,表明6月份存在R.equi感染的高风险,应注意消毒和预防。其次,采用优化改良的菌落印记方法进行全国部分马场土壤R.equi的流行病学调查。此次调查发现:国内马场土壤中普遍存在R.equi,其平均量达10~6 CFU/g;训练场和打圈场的R.equi菌量和分离率都相对较高,而马场和季度之间的R.equi菌量和分离率均无明显差异,表明R.equi在马场土壤中的分布与马匹活动有关,与季节、地理位置等其它因素无明显相关性。因此,马场应注意马匹活动区域的定期清洁和消毒。最后,通过R.equi的NANAT分离培养方法,从我国马场土壤中分离了共57株R equi(1株致病性R.equi)。首次发现我国R.equi分离株存在大环内酯类药物耐药性及相应耐药基因erm(46)阳性株,被检株的利福平MIC(Minimum inhibitory concentration,MIC)折点均小于0.0625μg/mL,且暂未发现利福平耐药性菌株。与其它国家该菌分离株的优势毒力相关蛋白的vap基因不同,我国R.equi分离株均含有vapE基因,阳性率为100%,但其在R.equi致病性中的相应作用仍待进一步研究。本研究首次获得我国马场R.equi在空气、土壤中的流行病学特征信息及理化特征、药敏特性和毒力基因情况,为我国R.equi防控提供理论和数据支撑,为马红球菌病的治疗提供理论基础和依据,并为我国马红球菌种质资源库的建立提供基本资源,具有重要的公共卫生学意义。
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