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RIP的表达变化在17-AAG逆转胆管癌细胞对TRAIL耐受的作用,并探讨其作用机制。选取人胆管癌细胞系RBE为研究对象,根据实验分为了RAIL组、17-AAG组、TRAIL联合17-AAG组。TRAIL组:将TRAIL分为不同浓度组(10ng/ml、30ng/ml、100ng/ml、300ng/ml、1000ng/ml)分别给药。17-AAG组:将不同浓度17-AAG(0.1μmol,0.3μmol,0.5μmol,1μmol)分别给药。TRAIL联合17-AAG组先将不同浓度17-AAG(0.1μmol,0.3μmol,0.5μmol,1μmol)分别给药,然后将常用剂量TRAIL(100ng/ml)分别作用于上述不同浓度的17-AAG组中,通过MTT法检测TRAIL组、17-AAG组、TRAIL联合17-AAG组的细胞增殖抑制作用,并通过DNA片段梯度分析,Westernblot法检测细胞内是否发生了Caspase级联反应,从而探讨TRAIL联合17-AAG对RBE的杀伤作用是否通过诱导胆管癌细胞凋亡来实现。最后利用Westernblot法检测细胞死亡受体和Caspase-8的上游调节蛋白RIP的表达的变化,来揭示17-AAG逆转RBE对TRAIL耐受的作用机制。不同浓度的TRAIL处理RBE细胞24小时后抑制率与对照组比较无统计学差异,人胆管癌RBE细胞对TRAIL耐受。不同浓度的17-AAG联合应用TRAIL(100ng/ml)对RBE的抑制率与单独应用17-AAG相同浓度相比,二者具有显著差异(P＜0.01)。DNA ladder检测实验结果表明17-AAG与TRAIL联合应用可见清晰的DNA ladder出现,而TRAIL单独作用的细胞出现DNA ladder较少。通过Westernblot法检测发现17-AAG协同TRAIL做用后使细胞内放生了Caspase级联反应,从而证实17-AAG与TRAIL合用是通过引起细胞凋亡而起到抑癌作用。Westernblot法进一步检测二者合用后的DR5受体未见表达上调,而RIP表达下调,这一现象考虑是引起其凋亡的机制。胆管癌细胞系RBE对TRAIL单独作用表现出耐药性,经17-AAG预处理后可逆转这一耐药性。TRAIL联合17-AAG可以诱导胆管癌细胞凋亡,其机制是17-AAG通过下调胆管癌细胞RIP的表达从而解除了Caspase-8的抑制,诱发了细胞的凋亡