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目的：膜性肾病(membranous nephropathy, MN)是引起成人肾病综合征常见的病理类型之一,是以肾小球基底膜(glomerular basement membrane, GBM)上皮细胞下免疫复合物沉积伴基底膜弥漫性增厚为特征的一组疾病。根据病因可将MN分为特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy, IMN)和继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy, SMN),病因不明者称为IMN。SMN的病因主要包括感染、肿瘤、药物、毒物及其他自身免疫性疾病等。IMN好发于中老年人,发病高峰年龄为40-50岁,男女比例约为2：1,成人与儿童比例约为26：1。有调查报道显示,IMN占我国原发性肾小球疾病的9.89%。IMN临床过程多样,仅有1/4至1/3的患者可在5年内达到完全自发性缓解,儿童中可达50%,40%的患者在5-15年后进展为终末期肾病(end-stage renal disease, ESRD),故积极探索防治MN的有效途径,以阻止或延缓其进展至ESRD是我们现阶段的首要任务。IMN的发病机制尚不完全明确,一般认为是在外界环境及内在因素的刺激下,循环免疫复合物沉积或原位免疫复合物形成导致免疫反应,上皮侧出现免疫复合物及膜攻击复合物C5b-9的形成,造成局部组织损伤。目前已发现的成人IMN的特异性靶抗原包括M型磷脂酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor, PLA2R)、醛糖还原酶(aldose reductase, AR)和超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase, SOD2)。研究显示,在IMN患者肾活检标本中发现了细胞衰老的标志物P16INK4a,因此推测,细胞的衰老可能参与了IMN的发生发展。细胞衰老(cell senescence)是指细胞在结构和功能上逐渐出现的退行性变化,是一种不可逆转的生长停滞现象。真核细胞周期主要有两个重要的调控点,即G1-S和G2-M,而衰老细胞停滞于G1期,不能顺利进入S期。细胞周期受调节因子的调控,其中细胞周期蛋白(cyclin)和细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)促进细胞增殖、分化,是细胞周期的正调节因子；而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(cyclin-dependent kinase inhibitor, CKI)通过抑制CDK的活性,导致细胞周期停止,是细胞周期的负调节因子。目前已知CKI分为两类：一类为p16家族,包括p15、p16、p18、p19,这些基因能特异性地抑制cyclinD-CDK4/6-pRb的磷酸化过程；另一类为p21家族,包括p21、p27和p57,对CDK有广泛抑制作用。研究发现,细胞衰老时p16INK4a基因的mRNA转录及蛋白表达水平均明显增高,而且当年轻细胞中导入p16INK4a后可出现衰老表型,因此认为,p16INK4a是细胞寿限的关键调控基因。P16INK4a表达于正常成人的衰老组织中,通过p16INK4a-cyclinD/CDK4/6-pRb-E2F途径调控细胞周期,影响细胞寿命。许多外界刺激和内在因素也可上调p16INK4a的表达,从而导致正常细胞过早的出现衰老表型。本研究旨在分析p16INK4a在IMN患者肾组织中的表达,探索细胞衰老与IMN发病机制的相关性,从而进一步揭示IMN的发病机制,为指导临床治疗及判断预后提供依据。方法：选取河北医科大学第三医院肾内科于2014年6月至2015年1月诊治的IMN患者30例(Ⅰ组),所有患者均为首次经肾穿刺活检病理检查确诊,并应用免疫组织化学方法检测患者肾组织中抗PLA2R抗体的表达呈阳性,将其按年龄分为18-29年龄组(Ⅰa组)、30-49年龄组(Ⅰb组)、50-69年龄组(Ⅰc组)。同时收集首次经肾穿刺活检病理检查确诊的微小病变性肾病(minimal change disease, MCD)患者9例为对照组(Ⅱ组),同样将其按年龄分为18-29年龄组(Ⅱa组)、30-49年龄组(Ⅱb组)、50-69年龄组(Ⅱc组)。应用免疫组织化学方法检测IMN组和MCD组患者肾组织中p16INK4a的表达及表达部位,结果通过图像分析系统(Image-ProPlus,IPP)进行半定量分析。应用SPSS 20.0统计软件对实验数据进行统计学处理,P<0.05时差异有统计学意义。计量资料用均数±标准差(x士s)表示,计数资料采用率或构成比表示。正态分布资料组间均数比较采用两独立样本均数的t检验。相关性检验采用直线相关分析。结果：p16INK4a在IMN组和MCD组患者肾组织肾小管上皮细胞核中均有表达,表达无明显差异；p16INK4a在IMN组患者肾组织肾小囊壁层上皮细胞核和足细胞核中均有一定表达,在MCD组有极少表达,各年龄组IMN患者肾组织肾小球内p16INK4a的表达较MCD组均显著增强(P<0.01)。各年龄组IMN患者肾小球内p16INK4a的表达与24小时尿蛋白定量均呈正相关(ra=0.978,P<0.001；rb=0.874,P=0.001,P<0.05；rc=0.947,P<0.001)。结论：与对照组相比,p16INK4a在IMN患者肾组织中表达增高,且与24小时尿蛋白定量呈正相关,证实了在IMN的发病过程中存在着细胞的过早衰老现象。