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研究目的(1)研究缺血预处理及不同剂量的舒芬太尼预处理对大鼠腹主动脉缺血再灌注后血管内皮细胞损伤是否具有早期保护作用;(2)研究阿片受体、一氧化氮及一氧化氮合酶是否介导了舒芬太尼预处理的早期血管内皮细胞保护作用;(3)用免疫组化及反转录聚合酶链式反应方法检测缺血预处理及舒芬太尼预处理早期内皮型一氧化氮合酶及诱生性一氧化氮合酶表达的变化,探索两者在早期保护中的作用。研究方法实验分为三部分:(1)SD大鼠随机分为6组:NA组、I/R组、IPC组、SUE1组、SUL2组和SUL3组。假手术组(NA组)制备好腹主动脉套线模型后不做任何处理,缺血再灌注损伤组(I/R组)给予缺血30 min、再灌注120 min,缺血预处理组(IPC组)缺血前给予三次5 min缺血、5 min再灌注的预处理,舒芬太尼预处理组(SUL1组、SUL2组和SUL3组)缺血前分别给予舒芬太尼5μg/kg、10μg/kg和20μg/kg预处理,分别测定血浆内血浆可溶性血栓调节蛋白浓度及假性血管血友病因子含量,行循环内皮细胞计数,并用光学显微镜和电子显微镜观察血管内皮细胞形态结构的变化,确定缺血预处理及不同剂量的舒芬太尼预处理对大鼠腹主动脉缺血再灌注后血管内皮细胞损伤是否具有早期保护作用;(2)单独应用阿片受体阻滞剂纳洛酮(NLX组)、一氧化氮前体左旋精氨酸(L-Arg组)、一氧化氮合酶阻滞剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME组)或联合舒芬太尼10μg/kg预处理(N-SUL组、LA-SUL组、LN-SUL组)后行腹主动脉缺血再灌注,并与假手术组(NA组)、缺血再灌注损伤组(UR组)、缺血预处理组(IPC组)和舒芬太尼10μg/kg预处理组(SUL组)比较,以血浆内血浆可溶性血栓调节蛋白浓度、血浆内假性血管血友病因子含量和循环内皮细胞计数为判断血管内皮细胞损伤的指标,并检测血浆一氧化氮浓度、组织匀浆一氧化氮浓度及组织匀浆一氧化氮合酶活性,确定阿片受体、一氧化氮及一氧化氮合酶是否介导了舒芬太尼预处理的早期血管内皮细胞保护作用;(3)用免疫组化及反转录聚合酶链式反应方法检测假手术组(NA组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、缺血预处理组(IPC组)及舒芬太尼10μg/kg预处理组(SUL组)大鼠腹主动脉内皮型一氧化氮合酶及诱生型一氧化氮合酶表达的变化,并探索两者在血管内皮细胞早期保护中的作用。研究结果(1)实验模型缺血再灌注成功,与NA组相比,其余五组腹主动脉阻断期间平均动脉压升高,心率减慢,开放再灌注时平均动脉压降低,心率增加,再灌注1 h内平均动脉压和心率逐渐恢复至基础值,I/R组平均动脉压及心率波动较IPC组、SUL1组、SUL2组和SUL3组更为明显,该四组血浆内血浆可溶性血栓调节蛋白浓度、血浆内假性血管血友病因子含量和循环内皮细胞计数明显低于I/R组,光镜和电镜结果亦显示该四组血管内皮细胞损伤减轻,SUL2组血浆内血浆可溶性血栓调节蛋白浓度、血浆内假性血管血友病因子含量和循环内皮细胞计数低于SUL1组和SUL3组,光镜和电镜下损伤亦好于该两组;(2)NLX组血浆内血浆可溶性血栓调节蛋白浓度、血浆内假性血管血友病因子含量、循环内皮细胞计数、血浆一氧化氮浓度、组织匀浆一氧化氮浓度及组织匀浆一氧化氮合酶活性与I/R组无明显区别,N-SUL组各指标好于I/R组,但较IPC组及SUL组差,L-Arg组各指标与IPC组及SUL组无明显区别,LA-SUL组好于IPC组及SUL组,L-NAME组及LN-SUL组各指标较I/R组、IPC组及SUL组差;(3)免疫组化显示阳性结果为胞浆内棕色反应产物,IPC组与SUL组的内皮型一氧化氮合酶阳性细胞数多于NA组及I/R组,I/R组诱生型一氧化氮合酶多于其余各组,反转录聚合酶链式反应结果显示IPC组和SUL组内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达较NA组与I/R组增强,各组诱生型一氧化氮合酶的表达均较低,无显著差异。研究结论(1)缺血预处理及舒芬太尼预处理对大鼠腹主动脉缺血再灌注后血管内皮细胞损伤均具有早期保护作用,10μg/kg是相对最佳的预处理保护剂量;(2)纳洛酮能部分阻断保护作用,表明阿片受体可能部分介导了舒芬太尼预处理的早期保护作用,左旋硝基精氨酸甲酯完全阻断了保护作用,表明一氧化氮及结构型一氧化氮合酶在舒芬太尼预处理的早期保护作用中可能起主要作用;(3)缺血预处理及舒芬太尼预处理使早期血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶表达增加,而诱生型一氧化氮合酶在早期保护过程中未发生明显变化。