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背景: 非伤寒沙门氏菌是全球细菌性肠道感染的一个主要病原体,感染者多为儿童,且无疫苗预防。第三代头孢菌素是儿童感染患者主要的临床治疗药物,随着产超广谱β-内酰胺酶菌株的增加,治疗效果也逐渐下降。据国内外文献报道,非伤寒沙门氏菌对第三代头孢菌素的耐药率仍处于较低水平,但是通过监测数据显示,中山市耐第三代头孢的非伤寒沙门氏菌阳性率逐年增加,远超国内外所报道的数据,成为中山市重大的公共卫生问题。 目的: 1、了解2013年至2015年中山市非伤寒沙门氏菌的流行特征,掌握中山市非伤寒沙门氏菌株的血清型分布、流行季节特点、流行区域分布和感染者的年龄、性别分布,为预防和控制非伤寒沙门氏菌引起的感染性腹泻的发生和流行提供科学依据。 2、分析2013年至2015年中山市培养分离的非伤寒沙门氏菌对三代头孢类抗菌素的耐药情况,为指导临床医生合理选择使用抗生素提供科学依据。 3、对多重耐药菌株进行脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型技术(Multilocus Sequence Typing,MLST)分型,以及全基因组测序分析,寻找多重耐药菌株的分子特征及其之间的遗传学关系,为控制耐药菌的传播流行提供决策依据。 方法: 1、非伤寒沙门氏菌感染流行特征分析。收集2013年至2015年全球食源性感染监测网络(Global Foodborne Infections Network,GFN)系统中山市儿童大便非伤寒沙门氏菌培养阳性的病例,搜集这些病例的性别、年龄、居住地、发病时间和主血清分型等相关信息,用描述性流行病学研究方法,对病例的特征进行描述。 2、收集阳性病例的药敏结果,分析其对三代头孢菌素的耐药情况,分析多重耐药菌株的药敏结果。 3、多重耐药菌株分子分型及遗传学关系。按照标准操作方案,对多重耐药的肠炎沙门菌进行PFGE和MLST分子分型。对4例多重耐药菌株进行全基因组的测序,并在此基础上对4例菌株基因组进行差异性分析,经过数据分析后对序列进行拼接、组装并获得基因组图谱;通过序列比对,量化菌株之间的遗传发育距离,确定病例菌株之间的关系。 结果: l、2013年至2015年共收集肠炎患者大便标本3040例,分离得到非伤寒沙门菌菌株402例,2013-2015年检出率分别为10.3%、12.2%和16.8%;最小发病年龄1月,最大年龄5岁8个月,平均13.62个月;男女比例为1.48:1;菌株分离主要来源于东区、三乡镇、五桂山镇、开发区,呈散发趋势,但以五桂山山系周边多发。发病高峰期为每年7~8月份。血清型以4,5,12:i:-、4,12:i:-和4,5,12:i:1,2三种最常见,耐药菌株多为鼠伤寒沙门菌及其变种。发现4例产超广谱β-内酰胺酶的多重耐药菌株S1、S2、S3和S4,均为鼠伤寒变种。 2、耐药情况:2013-2015年分离沙门菌株中头孢曲松及头孢他啶耐药率呈线性上升趋势,差异有统计学意义(χ2=30.3,P<0.01),2015年7月头孢他啶耐药率最高,非伤寒沙门菌对头孢曲松耐药较头孢他啶多,差异有统计学意义(KCC=0.78,P<0.01)。4例多重耐药菌株S2、S3、S4的药敏结果几乎相同,对于头孢菌素耐药菌株S2、S3、S4与S1差异较大。菌株S1抗药基因谱与菌株S2、S3、S4差异大。 3、PFGE可将2015年7月份临床治疗困难的多重耐药鼠伤寒沙门菌分为两个大组,菌株S2、S3、S4落到同一个大簇Cluster B中。菌株S2、S3、S4抗原式相同并均与S1有差异。菌株S2、S3、S4均有blaCTX-M-55基因。多位点序列分型技术发现菌株S1为ST19型,菌株S2、S3、S4为ST34型。系统发育:菌株S1与菌株S2、S3、S4亲缘关系较远,分属不同的大簇中。菌株S2、S3、S4的WGS形似度非常高,几乎可确定为同一来源。 结论: 1、2013年到2015年中山市非伤寒沙门菌阳性率呈逐年上升趋势;血清型以鼠伤寒沙门菌最常见,耐药菌株多为鼠伤寒沙门菌及鼠伤寒沙门菌变种。 2、非伤寒沙门菌株对头孢曲松及头孢他啶耐药率逐年增加,非伤寒沙门菌对头孢曲松耐药较头孢他啶多。 3、4例多重耐药菌株均为鼠伤寒沙门菌变种,菌株S2、S3、S4的WGS形似度非常高,几乎可确定为同一来源。blaCTX-M-55基因为菌株S2、S3、S4所特有,可能是造成头孢菌类药敏差异的主要原因。