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肺癌是我国目前发病率与死亡率均位居首位的恶性肿瘤。综合治疗在肺癌的治疗中发挥着越来越重要的作用,其中的一个重大进展是分子靶向治疗药物的成功应用。吉非替尼是一种口服的有活性、选择性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,2003年被美国FDA批准用于治疗晚期非小细胞肺癌,目前已成为肺癌分子靶向治疗中较为成熟的药物。临床研究已表明,吉非替尼单药治疗肺癌的有效率仅为10%～20%,因此人们希望与化疗药物联合以进一步提高抗肿瘤效应。奥沙利铂是肺癌治疗中常用的第三代铂类化合物。为此,我们开展了吉非替尼与奥沙利铂联合应用于肺癌治疗的基础研究,评价吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案对于人肺癌细胞A549的抗肿瘤效应,以期为吉非替尼的临床合理应用提供必要的实验基础与依据。本研究包括三部分内容:(1)吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案的杀伤作用体外观察;(2)吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案的抗肿瘤效应体内评价;(3)吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案的抗肿瘤作用机理初探。首先,我们通过MTT细胞杀伤实验观察了吉非替尼单药、奥沙利铂单药以及两药序贯方案对于人肺癌细胞A549的体外杀伤作用。将不同浓度梯度的吉非替尼单药或奥沙利铂作用于A549细胞,于作用后24、48、72小时后分别测定药物对细胞的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50值)。结果发现,吉非替尼、奥沙利铂对于A549细胞的杀伤作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。其中吉非替尼单药作用24、48、72小时的IC50值分别为92.3±3.10μmol/L、32.5±1.05μmol/L、5.21±0.80μmol/L,作用72小时的IC50值是作用24小时的近1/20。而奥沙利铂单药作用24、48、72小时的IC50值分别为1.21±0.03μmol/L、0.64±0.05μmol/L、0.23±0.02μmol/L,作用72小时的IC50值是作用24小时的近1/6。依据上述结果,我们进一步观察了吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案对于A549细胞的联合杀伤作用。吉非替尼与奥沙利铂序贯方案设定如下三组:先奥沙利铂24小时后吉非替尼72小时、先奥沙利铂+吉非替尼24小时后吉非替尼48小时和先吉非替尼72小时后奥沙利铂24小时;三组IC50值分别为3.20±0.01μmol/L、6.18±0.02μmol/L和8.41±0.01μmol/L。三组序贯方案的联合指数(CI值)结果为:(1)先奥沙利铂24小时后吉非替尼72小时组CI值小于1,提示两药间为协同作用;(2)先奥沙利铂+吉非替尼24小时后吉非替尼48小时组CI值接近1,两药间接近相加作用;(3)先吉非替尼72小时后奥沙利铂24小时组CI值大于1,两药间为拮抗作用。上述结果表明,吉非替尼与奥沙利铂的合理序贯给药可起到协同作用。其次,为证实上述体外作用结果,我们建立了裸鼠移植瘤模型,体内评价吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案的抗肿瘤效应。将A549细胞以2×107个/只接种至BALB/C裸鼠皮下,分成六种给药方案治疗:(1)对照组;(2)奥沙利铂组;(3)吉非替尼组;(4)先奥沙利铂后吉非替尼组;(5)合用后吉非替尼组;(6)先吉非替尼后奥沙利铂组。连续观察35天,测定裸鼠体重变化、肿瘤体积生长曲线和瘤重变化。结果表明,先奥沙利铂后吉非替尼组裸鼠的体重增加与其它各组相比无统计学差异(P>0.05)。先奥沙利铂后吉非替尼组肿瘤生长最为缓慢,抑瘤率为58.9%(P<0.05)。上述体内结果提示,吉非替尼与奥沙利铂联合用药不增加药物毒性,先奥沙利铂后吉非替尼组对裸鼠移植瘤有较强的抑制作用。最后,为探讨吉非替尼与奥沙利铂联合的作用机理,我们采用流式细胞学技术,检测了不同联合方案给药后A549细胞的凋亡发生和细胞周期分布。结果提示,先奥沙利铂后吉非替尼组的凋亡率为22.3%,较先吉非替尼后奥沙利铂组的凋亡率16.3%高(P<0.05),而合用后吉非替尼组的凋亡率为20.2%。奥沙利铂组主要将A549细胞阻滞在S期(70.0%);吉非替尼组主要将细胞阻滞在G0/G1期(40.3%)。先奥沙利铂后吉非替尼组G2/M期细胞较其它给药组明显增加,达到37.9%(P<0.05);而先吉非替尼后奥沙利铂组及合用后吉非替尼组G0/G1期细胞较对照组均有轻度升高,分别为34.4%(P=0.35)、36.3%(P=0.24)。上述结果表明,先奥沙利铂后吉非替尼序贯方案具有相对较高的凋亡率。先奥沙利铂后吉非替尼序贯方案将细胞阻滞在G2/M期,干扰损伤细胞的修复,维持奥沙利铂诱导的凋亡。而吉非替尼同时或先于奥沙利铂给药仅使G0/G1期细胞比例升高,从而削弱了后续奥沙利铂的作用。通过以上结果,我们认为:吉非替尼与奥沙利铂联合的体内外抗肿瘤作用均存在方案依赖性。先奥沙利铂后吉非替尼序贯方案具有较强的抗肿瘤效应,其机理可能与抑制化疗后肿瘤细胞的损伤修复,维持化疗诱导细胞凋亡作用有关。本研究为吉非替尼的合理临床应用提供了参考。