刺山柑总黄酮的提取及药效学研究

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本实验探讨刺山柑总黄酮的醇溶超声提取、大孔吸附树脂分离的最佳条件,及其抗炎、镇痛、调节免疫以及对大鼠佐剂性关节炎的干预作用。以新疆吐鲁番野生刺山柑果实为原料,正交设计优化醇溶超声方法提取刺山柑中总黄酮,选择最佳提取条件;利用静、动态吸附-洗脱试验筛选出分离效果较好的大孔吸附树脂对刺山柑中总黄酮成分进行纯化;建立醋酸致小鼠扭体、电热板致痛、二甲苯致小鼠耳廓肿胀以及蛋清致小鼠足趾肿胀四种实验模型,对刺山柑总黄酮抗炎镇痛效果进行初步研究;利用环磷酰胺对小鼠皮下多点注射制造免疫低下动物模型,与阳性药左旋咪唑对比,考察刺山柑中总黄酮对正常以及免疫低下小鼠的免疫调节作用;通过对大鼠右后足趾皮下注射弗式完全佐剂制造大鼠佐剂性关节炎模型,于给药21天时以大鼠足趾肿胀趋势、关节病变及滑膜病理变化的组织切片观察、局部炎症中炎症因子含量、血清中细胞因子含量、血液常规检测及血液沉降率、类风湿因子等生理生化指标的变化,对刺山柑总黄酮干预类风湿性关节炎疾病的药效学进行研究。实验结果表明,正交实验筛选出在室温条件下,以浓度为70%的乙醇、超声60min、料液比为1:40时提取刺山柑总黄酮效果最佳;动、静态吸附-洗脱实验筛选出H103型大孔树脂的分离纯化效果最优,通过芦丁标准品回归方程测得总黄酮含量为63.98%,其供试药总黄酮含量为15.45mg/ml。在小鼠抗炎镇痛实验中,刺山柑中总黄酮能够有效减少醋酸所致小鼠扭体的次数,延长热板致小鼠痛阈反应时间,缓解二甲苯致小鼠耳廓肿胀及蛋清致小鼠足趾肿胀。对于正常小鼠和免疫低下小鼠,刺山柑中总黄酮均能有效增加免疫器官的脏器系数、增强巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、提高脾细胞增殖活性,达到提高免疫力的作用。在大鼠佐剂性关节炎试验中,其能够有效缓解组织炎症引起的肿胀、保护滑膜组织,降低炎性细胞浸润;在血液生化指标检测中,刺山柑中总黄酮可降低炎症介质和细胞因子IL-6、TNF-α含量,减少白细胞聚集,防止血液沉降速率的加快,达到治疗类风湿性关节炎的目的,其治疗效果随剂量的升高呈现一定的量效关系。
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