论文部分内容阅读
目的：结合临床及体外实验初步探讨Notchl在宣威女性肺癌中的表达水平、生物学功能及分子作用机制。方法：1.Notchl在宣威女性肺癌患者中的表达及临床意义研究：在通过免疫组织化学方法比较女性肺癌(其中宣威地区54例、非宣威地区36例)及肺良性病变组织(其中宣威地区15例,非宣威地区13例)中Notch1表达的基础上,重点研究54例宣威女性肺癌患者的癌组织及远端正常肺组织样本,应用免疫组织化学技术检测上述样本中的Notch1表达,并结合患者的临床资料做Kaplan-Meier单因素生存分析和Cox多因素回归分析。2.抑制Notch1基因表达对宣威女性肺癌细胞XWLC-05生物学特性的影响及作用机制研究：通过脂质体将siNotchl转染入宣威女性肺癌细胞系XWLC-05,利用qPCR及Western-blot实验验证XWLC-05细胞中Notchl基因的抑制效果；通过MTT实验、Transwell实验、透射电镜、流式细胞术实验和测试caspase-3活性等实验,来研究Notch1基因表达抑制对XWLC-05细胞的增殖、侵袭、形态、细胞周期、细胞凋亡和caspase-3活性等指标的影响。同时构建Notch1基因表达质粒pIRES2-EGFP-Notchl,通过"Rescue功能回复实验”验证siNotchl干扰的特异性,以初步探讨Notchl基因的分子作用机制。3.Notch1在宣威女性肺癌原发灶及脑转移瘤组织中的表达及临床意义研究先后采集20位宣威女性肺腺癌患者的肺癌原发灶(20例)和脑转移瘤组织(20例)标本,甲醛固定,应用免疫组织化学技术检测肺癌原发灶和脑转移瘤组织标本中的Notch1表达。结果：1.宣威女性肺癌患者中Notch1的表达及临床意义研究：1) Notch1蛋白在女性肺癌组织中的表达显著高于在肺良性病变组织中的表达(P<0.05);Notch1在宣威和非宣威地区女性肺癌组织中的阳性表达率分别为70.37%和69.44%,两者比较无显著性差异(P>0.05)。2)宣威女性肺癌患者肿瘤组织及远端正常肺组织免疫组织化学检测显示,Notch1蛋白主要表达于细胞质,在肺癌和远端正常肺组织中的阳性表达率分别为70.37%(38/54)和25.9%(14/54),两者比较有显著性差异(P=0.000)；Notch1蛋白在临床不同分期(P=0.000)、淋巴结是否转移(P=0.007)及肿瘤分化程度不同(P=0.000)的患者中表达有显著性差异；Kaplan-Meier单因素生存分析显示：Notch1蛋白阳性和阴性表达组的中位生存期分别为27个月和38个月,两者比较有显著性差异(P=0.041),无淋巴结转移患者的中位生存期长于有淋巴结转移的患者(P=0.026),早期患者的中位生存期长于进展期患者(P=0.000)；多因素Cox风险回归模型显示：宣威女性肺癌预后判断的独立影响因素为病理分期。2.靶向抑制Notch1基因表达对宣威女性肺癌细胞XWLC-05生物学特性的影响及作用机制研究：siNotch1可有效抑制XWLC-05细胞中Notch1基因的表达,siNotch1转染XWLC-05细胞后,与对照组相比,siNotch1转染组细胞的增殖、侵袭能力也明显减低(P<0.01)。电镜显示细胞出现凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测显示Notch1基因受抑制后细胞的早期凋亡率明显高于对照组细胞(P<0.01),并且出现G0/G1期细胞周期阻滞；同时,与对照组相比,细胞中caspase-3的活性明显升高(P<0.05)。转染表达质粒pIRES2-EGFP-Notch1后有效逆转了siNotch1对XWLC-05细胞以上生物学功能的影响。RNA功能回复实验(rescue control)排除了siNotch1中的脱靶效应,反向验证了Notch1基因表达抑制对宣威女性肺癌细胞生物学功能的影响。3. Notchl在宣威女性肺癌患者原发灶及脑转移瘤组织中的表达差异及临床意义研究：Notchl蛋白阳性染色为棕黄色颗粒,主要定位于细胞质,在肺癌原发灶组织中的阳性表达率为65%(13/20)；在肺癌脑转移瘤组织中的阳性表达率为85%(17/20),两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。初步推测,Notchl在宣威女性肺腺癌脑转移过程中可能起到部分作用。结论：1.宣威女性肺癌组织中存在Notchl基因表达异常升高。2. Notchl的表达水平结合临床分期与宣威女性肺癌患者的病情评估及预后判断有一定的关系。3. Notchl可能通过提高细胞的增殖能力及抑制caspase-3依赖的凋亡途径来促进宣威女性肺癌的进展。4. Notch1在宣威女性肺腺癌脑转移过程中可能起到部分作用。