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前言子宫内膜癌是女性生殖系统中常见的恶性肿瘤之一,对化疗药不甚敏感。子宫内膜癌形成的分子调节机制目前尚未完全明了。不少学者已证明30%～40%的子宫内膜癌中存在HER—2/neu基因的扩增和高表达。HER—2/neu又称C-erbB2基因,它编码一个185kD的糖蛋白P185,与表皮生长因子受体(EGFR)十分近似,通过基因扩增和蛋白产物的过度表达而与人类肿瘤的发生有关。此外,HER-2/neu过表达也增加肿瘤细胞的转移能力。在转染研究和临床观察中还发现,HER-2/neu过表达还改变了对激素和化疗药物的敏感性。总之,HER—2/neu蛋白的过度表达在子宫内膜癌的发生、发展中起重要作用,并可作为判断预后的一个指标。因此,HER-2/neu可以成为此基因过度表达的肿瘤的有意义的治疗靶点。RNAi技术已成为基因治疗的热点,是一种可靠阻抑基因表达的新方法,是指一些小的双链RNA(short interfering RNA,siRNA)可以高效、特异地阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱导细胞表达出特定基因缺失的表型,这是一种在RNA水平的基因表达抑制。针对HER—2/neu的靶向治疗研究亦随之起步,与其他技术相比具有转染效率高,基因封闭作用强、稳定性高、细胞摄取相对容易等优点。目的本实验旨在应用shRNA有效干涉子宫内膜癌Ishikawa细胞中HER—2/neu基因的表达,为子宫内膜癌探索一种新的基因治疗方法。方法利用基因重组技术构建两条携带与短发夹状干涉RNA(shRNA)相对应的DNA序列的特异性重组质粒pSilener4.1-HER-2/eu-shRNA1,2及一条非特异性重组质粒,采用脂质体将其转染Ishikawa细胞,RT-PCR法检测转染特异性和非特异性质粒后HER-2 mRNA的表达;Annexin-V检测三组细胞凋亡率;MTT法检测转染前后细胞对顺铂的敏感性。结果RT-PCR结果显示:转染后24h,48h,72h,转染HER-2 shRNA1组和转染HER-2shRNA2组与转染Control组相比,HER-2 mRNA的表达明显降低。Annexin-V显示转染后24h,48h,72h,转染HER-2 shRNA1组和转染HER-2 shRNA2组与转染Control组相比,细胞凋亡率明显增高,差别有统计学意义(p≤0.01)。MTT结果显示:暴露于顺铂24小时后,三组细胞生长抑制率均随顺铂浓度的升高而升高,但转染HER-2/neu shRNA1组升高较为显著,差别有统计学意义(p≤0.05)。细胞对顺铂的敏感性明显提高。结论转染特异性重组质粒pSilener4.0-HER-2/neu-shRNA后,细胞中mRNA、的表达明显降低,细胞凋亡率明显增加,对顺铂的敏感性明显增加。从而成功的证明:转染携带与HER-2/neu shRNA对应的DNA序列的重组质粒可有效抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖,增加其化疗敏感性。