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在现今多种植物基因遗传转化方法中,农杆菌Ti 质粒和Ri 质粒介导的遗传转化方法是应用最早和最广泛的方法。甘蔗属单子叶植物,是禾本科中重要的糖料作物。甘蔗的生长期长,鳞翅目、同翅目等昆虫危害严重,采用基因工程的方法,培育甘蔗抗虫品种是防治甘蔗虫害的根本方法。本研究利用根癌农杆菌介导、农杆菌介导与负压相结合处理愈伤组织的方法,对甘蔗进行了Bt 基因的转化。在对影响根癌农杆菌转化效率的多种因素进行比较研究后,发现选择受体组织合适的生理状态、受体组织在转化前吹干、合适的侵染时间、共培养天数、抗生素的浓度、负压处理和添加乙酰丁香酮(AS)均直接影响根癌农杆菌转化的效率。选取胚性良好的Ⅱ型愈伤组织,在转化前吹干30～60min,浸染时间为45min,共培养3 天,头孢霉素浓度低于500mg/L,负压值为-0.05MP,AS 浓度为100mg/L 时可以提高转化效率,并据此建立了根癌农杆菌介导甘蔗的转化和再生系统。将心叶接种于MS+2.4-D1.5mg/L+30g/L 蔗糖,琼脂0.7%,pH5.8 培养基中25℃暗培养20d 后继代一次,诱导产生Ⅱ型胚性愈伤组织,用镊子将其夹碎成2mm2大小的小块,置入添加100mg/L AS 的根癌农杆菌LBA4404 菌液中,侵染时间为45min,共培养3 天后,转入MS+2.4-D1.5mg/L+30g/L 蔗糖+500mg/L Cef 培养基中恢复7 天,再转入MS+2.4-D1.5mg/L+30g/L 蔗糖+100mg/L Cef+10.0mg/L Km 中,遮光培养20d后,置入其MS+30g/L 蔗糖+100mg/L Cef+10.0mg/L Km 分化,卡那霉素抗性愈伤组织获得率在侵染45min 时达到最大值平均为29.66%;同时以甘蔗心叶愈伤组织材料,通过循环水式真空泵,产生负压,设定不同的负压值,在农杆菌菌液中感染5min 后,在负压条件下继续侵染15min 后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株,其中在负压为-0.05 时转化率达到最大值,其卡那霉素抗性愈伤组织获得率平均为37.5%。将抗性愈伤组织转入MS+2.4-D1.5mg/L+30g/L 蔗糖+100mg/L Cef+10.0mg/LKm 培养基中,诱导产生卡那霉素抗性苗,将抗性苗转入?MS+NAA1.0+15g/L 蔗糖+9.0mg/L Km 培养基中诱导生根,当苗长到5cm 时,将抗性苗移入大田种植,5 个月后取幼叶,提取总DNA,做PCR 杂交检测。本实验共获得118 株卡那霉素抗性植株,用2×CTAB 法提取总DNA,经酚纯化后,通过做PCR 检测,结果表明,有20 株植株呈阳性。抗虫实验结果表明,转基因甘蔗植株对鳞翅目钻心虫有一定的抗性。初步证明Bt 基因已成功整合到了转基因植物的植株中。