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目的:研究Cl C-3(voltage-gated chloride channel 3)氯通道蛋白在肿瘤耐药中的作用,确定其是通过调控P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)来介导肿瘤细胞耐药,为Cl C-3蛋白功能的研究开辟新的方向以及基于逆转肿瘤耐药的肿瘤治疗提供理论依据。方法:①Western blot检测人肺腺癌细胞株A549及其紫杉醇耐药株A549/T和人乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉素耐药株MCF-7/ADR中Cl C-3蛋白和P-gp的表达。②A549/T和MCF-7/ADR细胞转染Cl C-3小干扰RNA(Si-Cl C-3)抑制Cl C-3的表达,A549和MCF-7细胞转染Cl C-3表达质粒(pc DNA3.1/Cl C-3)增强Cl C-3的表达,MTT法检测抗癌药物紫杉醇对Cl C-3表达干预后细胞增殖的影响。③A549/T和MCF-7/ADR细胞转染Si-Cl C-3,A549和MCF-7细胞转染pc DNA3.1/Cl C-3,细胞免疫荧光结合激光共聚焦技术和Western blot检测Cl C-3蛋白和P-gp的表达水平。④A549/T和MCF-7/ADR细胞转染多药耐药基因(multi-drug resistance gene 1,MDR1)小干扰RNA(Si-MDR1)抑制P-gp的表达,A549和MCF-7细胞转染MDR1表达质粒(pc DNA3.1/MDR1)增强P-gp的表达,细胞免疫荧光和Western blot检测P-gp和Cl C-3蛋白的表达水平。⑤繁育MMTV-Py MT单转基因小鼠,建立和繁育Cl C-3过表达的自发乳腺肿瘤MMTV-Py MT/CLCN3双转基因小鼠,给予紫杉醇和阿霉素化疗干预;紫杉醇化疗方案分为M-N1(单转基因小鼠给予生理盐水)、M-PTX(单转基因小鼠给予紫杉醇)、MC-N1(双转基因小鼠给予生理盐水)和MC-PTX(双转基因小鼠给予紫杉醇)共4组;阿霉素化疗方案分为M-N2(单转基因小鼠给予生理盐水)、M-ADM(单转基因小鼠给予阿霉素)、MC-N2(双转基因小鼠给予生理盐水)和MC-ADM(双转基因小鼠给予阿霉素)共4组;测量小鼠体重、肿瘤重量、肿瘤体积和小鼠生存期。⑥实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中MDR1和Cl C-3 m RNA的表达;Western blot和免疫组化法检测肿瘤组织中P-gp及Cl C-3蛋白的表达。结果:①MCF-7/ADR与MCF-7相比,A549/T与A549相比,耐药细胞株Cl C-3和Pgp的表达量明显高于非耐药细胞株。②下调A549/T和MCF-7/ADR细胞Cl C-3的表达,紫杉醇对细胞增殖的抑制作用明显增强;增强A549和MCF-7细胞Cl C-3的表达,紫杉醇对细胞增殖的抑制作用明显减弱。③抑制A549/T和MCF-7/ADR细胞Cl C-3的表达引起P-gp的表达下调;增强A549和MCF-7细胞Cl C-3的表达则上调P-gp的表达。④抑制A549/T和MCF-7/ADR细胞MDR1的表达或增强A549和MCF-7细胞MDR1的表达都对P-gp的表达水平无明显影响。⑤MC-N1和MC-N2组肿瘤体积和重量分别显著高于M-N1组和M-N2组;MC-PTX组与M-PTX组相比,紫杉醇对肿瘤生长的抑制率降低;MC-ADM组与M-ADM组相比,阿霉素对肿瘤生长的抑制率降低;紫杉醇治疗可以提高MMTV-Py MT单转基因小鼠小鼠生存率,而对MMTV-Py MT/CLCN3双转基因小鼠小鼠生存率无影响。⑥与MMTVPy MT单转基因小鼠相比,MMTV-Py MT/CLCN3双转基因小鼠MDR1 m RNA和Pgp表达增加。结论:肿瘤细胞中Cl C-3与P-gp的表达水平呈正相关,Cl C-3在肿瘤细胞耐药中起着重要的作用,其介导肿瘤细胞耐药与上调P-gp的表达有关