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现代人类日益受到肥胖的困扰，因此，对肥胖的研究越来越引起关注。与肥胖相关的疾病主要有高血压、冠心病、高脂血症、脑梗塞（卒中）、糖尿病等。G蛋白β3亚单位上的GNB3基因存在着多态C825T位点，Gutersohn等对五种人群1153人的C825T等位基因分析研究表明，该位点的多态性与肥胖存在相关性。还发现GNB3基因825位上的多态性与孕妇产后正常体重恢复有关。GNB3基因825位上的多态性是指GNB3基因中第10个外显子的825位发生了胞嘧啶核苷酸（C）和胸腺核苷酸（T）的改变。该改变激活了一个隐蔽的剪切位点，选择性地对外显子9进行了剪切，造成外显子9转录的mRNA核苷酸序列第498-620bp的缺失，引起其编码的41个氨基酸的减少，导致GNB3结构少了一个WD螺旋区域，从而使β3亚单位的结构发生改变。β3亚单位结构的改变，增强了G蛋白的活性，Giα2亚单位的表达量相应增加。由于Giα2分子的表达增加会导致脂肪细胞过度增生及细胞内脂质堆积，因此最终会引起肥胖的产生。本研究采用荧光PCR技术与MGB（minor groove binder）探针技术结合，建立快速筛查GNB3基因C825T多态性的检测方法。通过对国内各个地区人群GNB3基因C825T多态性进行分析，确定国内GNB3基因C825T多态性的分布频率；同时测量研究人群的身高、体重、机体脂肪含量、BMI指标，分析上述肥胖相关指标与GNB3基因C825T多态性的相关性，为肥胖的预防性干预提供科学依据。1、材料与方法1．1样本资料人群年龄要求年满18周岁，选择全国21个省份各20份EDTA抗凝血，作为国内人群GNB3基因C825T多态性分布的研究样本；浙江大学邵逸夫医院体检人群207例EDTA抗凝血，作为GNB3基因C825T多态性与肥胖相关指标研究样本。其中男性138例，女性69例；年龄42.3±10.3岁。所有标本离体3小时内分离单个核细胞，-20℃冰箱保存备用。1．2实验方法1．2．1外周血单个核细胞（PBMCs）分离抽取抗凝血（EDTA抗凝）5ml。用FICOLL分离PBMCs，用PBS缓冲液洗涤三次。1．2．2基因组DNA提取采用Qiagen基因组核酸抽提试剂盒，操作流程按照说明书进行。1．2．3 PCR反应取抽提基因组DNA 2μl于20μl反应体积中进行PCR反应。反应体积组成如下：10×Buffer 2μl、dNTP 10mM/L（0.4μl）、MgCl2 25mmol/L（1.4μl）、2.5U TaqDNA多聚酶（0.5μl）、模板2μl、上、下游特异引物20pmol各0.5μl、去离子水12.7μl。引物序列为5’-AGGTCTGATCCCTGACCCAC-3和5’-FGCTTAGAGCAACACTGAGGG-3’。先在94℃变性3min，然后按下述条件循环30次：变性94℃20s、退火56℃20s、延伸72℃30s，最后72℃延伸10min，25℃冷却5min结束反应。然后进行琼脂糖电泳。1．2．4核酸序列测定采用末端终止法测序。1．2．5实时荧光PCR检测C825T基因多态性取基因组DNA 4μl于40μl反应体积中进行Real-Time PCR反应。反应体积组成如下：10×Buffer 4μl、dNTP 10mM/L（0.8μl）、MgCl2 25mmol/L（2μl）、2U TaqDNA多聚酶、模板4μl、上、下游特异引物各1μl、特异性鉴别探针各0.3μl去离子水26.1μl。引物序列为5’-TCTCCCACGAGAGCATCA-3’和5’-GTCGTCGTAGCCAGCGAA-3’。探针序列为5’-FAM-ATCACGTCCGTGGC-MGBNFO和5’-VIC-AAGGCCACAGACGT-MGBNFQ。先94℃变性3min，然后按下述条件循环40次：94℃10s、60℃50s，60℃采集光源。1．2．6肥胖相关指标测定测定指标包括身高、体重、腰围、臀围、脂肪含量。脂肪含量测定采用人体成份分析仪Inbody 3.0仪器测量。1．3统计学处理采用SPSS11.0统计软件包对研究资料进行统计分析（成组比较的T检验）。2、结果2．1人群GNB3基因C825T多态性频率分析国内21个省份420例人群GNB3基因C825T多态性频率调查结果为825T和825C单倍体的分布频率分别为46.90％和53.10％。基因型825T/T、825T/C和825C/C的分布频率分别22.38％、51.42％和28.10％，没有发现其它基因型，基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。2．2实时荧光PCR筛查与核酸序列测定结果比较20例样本通过核酸测序分析GNB3基因C825T多态性，结果C/C纯合型为5例，T/T为6例，C/T杂合型为9例，检测结果与荧光PCR检测结果完全吻合，而且呈一一对应关系。2．3 GNB3基因C825T多态性与肥胖相关指标相互关系基因型825T/T组体重指标显著高于825C/C组、而其他各组之间无统计学差异。基因型825T/T BMI指标为25.8±2.9，显著高于基因型825T/C（23.7±3.3）和825C/C（24.0±4.1）；基因型825T/C和825C/C BMI指标无统计学差异。基因型825T/T脂肪含量为30.3±5.9，显著高于基因型825T/C（27.19±6.0）和825C/C（27.6±5.9）；基因型825T/C和825C/C BMI指标无统计学差异。将无统计学差异的825T/C组和825C/C组数据合并后与825T/T组比较，体重指标无显著差异，BMI指标和脂肪含量指标在825T/T组显著增高。3、结论（1）建立了快速测定GNB3 T835C基因多态性的实时荧光PCR检测方法，方法灵敏度和特异性均为100％。（2）获得国内GNB3 T835C基因多态性和基因型分布频率，符合Hardy-Weinberg定律。（3） GNB3基因型与机体脂肪含量有关，基因型825T/T脂肪含量显著高于基因型825T/C和825C/C。