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本实验对具有优良农艺性状和较高配合力的玉米自交系X178,以及杂交组合X08/178、X04/178,剥取幼胚,进行组织培养,诱导胚性愈伤组织,筛选状态好的愈伤用于玉米的遗传转化。
将含有高赖氨酸蛋白基因AtMAP18的植物表达载体pR168-BAR及含有编码对赖氨酸反馈抑制不敏感的AK和DHDPS两个酶的基因的植物表达载体pBAR-AK-DH 用基因枪法共转化玉米胚性愈伤。共转化72皿,其中自交系X178 60皿,杂交组合08/178 8皿,04/178 4皿。愈伤组织用基因枪轰击后,经除草剂抗性筛选,得剑抗性愈伤组织,然后进行分化培养,得剑59株再生植株。bar基因PCR检测阳性植株有12株,其中3株含有ak基因。对获得的78株R1代玉米植株进行了bar基因 PCR检测,PCR检测阳性的有30株。对R1代的78株进行bar点杂交分析,有16株为阳性。又对R1代点杂交阳性的7株玉米进行了RT-PCR检测,bar RT-PCR阳性的有5株,其中ak的RT-PCR 阳性的有2株,AtMAP18 RT-PCR阳性的有1株。末得到共转化植株。