在过去的几十年里,虽然对疼痛的研究取得了很大的进步,但是针对慢性疼痛的治疗,仍然需要疗效确切并且副作用小的镇痛剂。天然产物是发现新药的重要来源之一,并且很多临床应用的镇痛剂如吗啡、阿司匹林,也是从天然产物中获得。为了研发新型、安全有效的镇痛剂,根据传统应用功效,选择湖北羊蹄甲为研究对象。湖北羊蹄甲Bauhinia glauca subsp. hupehana为豆科羊蹄甲属植物,性温,味苦涩,无毒。在民间用药中主要用于睾丸肿痛、疮疖肿痛等症的治疗,广泛的分布于我国西南和中南地区。尽管湖北羊蹄甲在民间用于治疗疼痛性疾病已有数百年的历史,但是对其镇痛活性及作用机制尚缺乏系统性研究。为开发其药用价值,验证民间用药基础,本论文对其地上部分85%乙醇粗提物的镇痛、抗炎活性进行了较为系统的研究,并对其主要化学成分进行了分离鉴定,然后对分离得到的部分单体化合物的活性进行了初步评价。1、镇痛、抗炎活性研究镇痛活性采用小鼠醋酸扭体实验、小鼠热辐射甩尾实验、小鼠热板实验以及谷氨酸诱导的疼痛实验对湖北羊蹄甲的85%的乙醇提取物进行了镇痛活性评价。醋酸扭体实验结果表明：总提物在剂量100、200 mg/kg灌胃给药,能显著的抑制小鼠醋酸扭体次数,表现出较强的镇痛活性,且镇痛活性与剂量成正相关；小鼠热辐射甩尾实验结果表明：总提物在剂量100、200 mg/kg灌胃给药,能显著的延长小鼠甩尾时间,显示出中枢的镇痛活性,且呈剂量依赖关系；小鼠热板实验结果表明：总提物在剂量100、200 mg/kg灌胃给药,能显著的延长小鼠在热板上发生舔足的潜伏时间,显示出较强的高位中枢参与的镇痛活性；谷氨酸诱导的疼痛实验结果表明：总提物在剂量100、200 mg/kg灌胃给药,能显著的减少由谷氨酸诱导的舔足次数,表现出较强的镇痛活性。湖北羊蹄甲各萃取部位的镇痛活性采用小鼠醋酸扭体实验和小鼠热辐射甩尾实验进行评价。小鼠醋酸扭体实验结果表明：乙酸乙酯和正丁醇部位在200 mg/kg灌胃给药下,能显著地抑制小鼠的醋酸扭体次数,为BHE的镇痛活性部位；小鼠热辐射甩尾实验结果表明：乙酸乙酯和正丁醇部位在200 mg/kg灌胃给药下,能显著延长小鼠受到热辐射而发生甩尾的时间,为BHE的镇痛活性部位,说明这两个部位的镇痛活性可能有中枢系统的参与。镇痛机制采用阿片受体、鸟苷酸环化酶以及K+通道拮抗实验对BHE的镇痛机制进行了初步评价。阿片受体拮抗实验结果表明：BHE的镇痛活性并不能被纳曲酮(非选择性阿片受体拮抗剂)拮抗,说明BHE的镇痛机制可能不涉及阿片受体；鸟苷酸环化酶拮抗实验表明：当BHE与亚甲基蓝(鸟苷酸环化酶抑制剂)合用时,BHE的镇痛活性明显增强,表明其镇痛活性可能有鸟苷酸环化酶的参与；K+通道拮抗实验结果表明：当BHE与格列本脲(K+通道抑制剂)合用时,BHE的镇痛活性被部分逆转,表明其镇痛机制可能有K+通道参与；谷氨酸诱导的疼痛实验结果表明：BHE能显著地减少由谷氨酸诱导的舔足次数,表明其镇痛机制可能有谷氨酸系统参与。急性毒性采用剂量逐级递增的方式对BHE的急性毒性进行了初步研究。结果表明,当BHE的剂量增加到2000 mg/kg,并未观察到小鼠有死亡现象,并且体重未出现显著变化。因此,BHE的LD50 (lethal dose,50%)应>2000 mg/kg。由于急性毒性的剂量2000 mg/kg为镇痛实验有效剂量(100 mg/kg, p.o.)的20倍,因此试验中所使用的剂量(50,100,和200 mg/kg, p.o.)为安全的使用剂量。抗炎活性采用角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀模型和二甲苯诱导的小鼠耳肿胀模型对湖北羊蹄甲85%乙醇提物的抗炎活性进行了初步评价。角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀实验结果表明：湖北羊蹄甲85%的乙醇提物在100、200 mg/kg腹腔注射给药下能显著地抑制大鼠的足跖肿胀,显示出较强的抗炎活性,且呈剂量依赖关系；二甲苯诱导的小鼠耳肿胀实验结果表明：BHE在100、200 mg/kg腹腔注射给药下能显著地抑制小鼠的耳肿胀,显示出较强的抗炎活性,且抗炎强度与剂量成正比。2、湖北羊蹄甲化学成分研究采用多种提取分离方式(热回流提取、液液分配、凝胶层析、正反相吸附层析、液相制备等)对湖北羊蹄甲乙醇提取物的主要化学成分进行研究,采用NMR、UV、MS等波谱方法对化合物的结构进行鉴定,共分离鉴定包括黄酮类、色原酮类、香豆素类、酚酸类、生物碱类、木脂素类、儿茶素类、甾体类等类型的化合物22个,化学成分以黄酮类化合物为主。包括：黄酮类化合物11个,酚酸类化合物3个,甾体类、生物碱类、木脂素类、儿茶素类、香豆素类、色原酮类、芳香醛类、芳香酯类各1个。分别为：β-谷甾醇、5,7-二羟基色原酮、伞形酮、茴香醛、肉桂酸、杜鹃素、peperomin B、3’,4’,7-三甲氧基黄酮、(E)-乙基-3-(4’-苯甲基)丙烯酸酯、4’-羟基-7-甲氧基二氢黄酮、3,4’,7-三羟基二氢黄酮、6,8-二甲基-5,7,4’-三羟基黄酮、3,5,4’-三羟基-7-甲氧基-8-甲基黄酮、没食子酸、木犀草素、槲皮素、漆黄素、圣草酚、没食子酸乙酯、(-)-表儿茶素、3’,4’,7-三羟基黄酮、N-(2-羟乙基)-N-甲基肉桂酰胺,其中peperomin B、N-(2-羟乙基)-N-甲基肉桂酰胺为从该属植物中首次分离得到。3、部分单体化合物的镇痛、抗炎活性评价采用小鼠醋酸扭体实验和小鼠热辐射甩尾实验对从湖北羊蹄甲中分离得到单体化合物—没食子酸、peperomin B和farrerol进行镇痛活性评价。小鼠醋酸扭体实验结果表明：peperomin B (50 mg/kg)腹腔给药能显著地减少小鼠的扭体次数,抑制率为54.89%,具有较好的镇痛活性,没食子酸和farrerol未表现出镇痛活性；小鼠热辐射甩尾实验结果表明：没食子酸、peperomin B和farrerol在50 mg/kg剂量下腹腔给药均不能延长小鼠甩尾的时间,未表现出中枢的镇痛活性。上述实验结果表明：peperomin B具有较好的外周镇痛作用,但不具有中枢镇痛活性。同时,二甲苯诱导的小鼠耳肿胀结果表明：peperomin B能显著地抑制小鼠耳肿胀程度,具有较好的抗炎活性。文献表明：peperomin B的抗炎机制主要是抑制TNF-a和IL-1的合成和释放,对NF-κB通路具有显著地抑制作用。