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目的：1.体外培养人肝细胞L02细胞系。2.研究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)在人肝细胞L02细胞系的糖原合成信号转导通路-MAPK通路。3.为GLP-1的拟胰岛素作用及其相关药物的临床应用的安全性和有效性提供理论依据。方法：1.体外培养人肝细胞L02细胞系,通过倒置显微镜形态学观察。2.实验分两部分：(1)第一部分：MTT方法检查GLP-1、INS对肝细胞存活数量的影响,是否有叠加作用。(2)第二部分：蛋白质印迹(western blot)检查来验证GLP-1对肝细胞糖原合成信号转导通路-MAPK通路的影响。分组为：Ctrl组,GLP-1 (10nmol/l)组,GLP-1 (10nmol/l)+PD98059组(25μmol/l), PD98059(25μmol/l)组,INS(10nmol/l)组,GLP-1+INS(10nmol/l)组。3. western blot测定磷酸化糖原合成酶(p-GS)和糖原合成酶(GS)的表达。4.通过western blot测定的p-GS与GS的表达量的光密度比值测定糖原合成酶的活性。结果：1.人肝L02细胞的传代培养情况良好。2. GLP-1组、INS组.GLP-1+INS联合组的OD值均明显高于Ctrl组(P<0.05),而GLP-1+INS联合组OD值又明显高于GLP-1组、INS组(P<0.05)。表明INS、GLP-1可以促进肝细胞的生长,且这种作用可以叠加。3. western blot结果示：与Ctrl组相比,INS组、GLP-1组的磷酸化糖原合成酶(p-GS)表达有明显减少。GLP-1组与GLP-1+PD组相比有明显的差异。GLP-1+ INS与Ctrl组、GLP-1组、INS组比较p-GS表达明显减少。表明INS、GLP-1均可促进p-GS向GS的转化,且这种作用可以叠加。MAPK阻断剂PD部分阻断了GLP-1的这一作用4. western blot表明,与Ctrl组相比GLP-1组、INS组的糖原合成酶(GS)表达有明显增加。GLP-1组与GLP-1+PD组相比有明显的差异,表明MAPK特异性阻断剂PD部分阻断了GLP-1促进GS表达的作用。GLP-1+ INS与Ctrl组、GLP-1组、INS组比较GS表达明显增高。表明INS、GLP-1可以促进糖原合成酶的表达,且这种作用可以叠加。5.用P-GS/GS的比值来表示GS的活性,比值越大,GS的活性越低。结果显示,与Ctrl组相比,GLP-1组、INS组、GLP-1+INS组GS的活性均明显提高(P<0.05)；表明INS、GLP-1可以增加GS的活性。GLP-1组、INS组与两者联合组比较,GS的活性较低(P<0.05),表明INS、GLP-1组联合对GS活性的增加有叠加作用。与GLP-1组相比,GLP-1+PD98059组的GS的活性明显降低(P<0.05),表明MAPK阻断剂PD部分阻断了GLP-1促进GS活性增加的作用结论：本研究通过体外实验证实GLP-1、INS均能促进人肝L02细胞系的生长,GLP-1和INS联合应用对其生长具有叠加作用。INS,GLP-1可直接作用于人肝细胞,促进失活状态的磷酸化的GS转化为具有活性的GS,上调糖原合成酶的表达,从而增加肝细胞中GS的活性来促进糖原合成。且这种作用可以叠加。MAPK抑制剂能够阻断GLP-1在肝细胞中介导的糖原合成酶的上调表达和糖原合成酶活性的增加,表明MAPK通路可能对GLP-1在人肝细胞中介导的糖原合成酶的上调表达以及糖原合成酶活性的增加发挥着重要作用。