不结球白菜离体培养再生体系的优化及抗病转基因研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shiweifeng15
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)是我国南方重要的叶菜类蔬菜,在蔬菜的周年供应中占有重要地位。然而不结球白菜生产中病毒病,霜霉病及软腐病等病害较严重,严重影响了其品质和产量,利用基因工程培育新品种是急需解决的问题。白菜类蔬菜是离体培养再生困难的一类作物,而基因工程等高科技育种技术都是建立在稳定可靠的高频率离体再生体系的基础上。探讨影响不结球白菜高频率再生体系的因素具有重要的理论和实践意义。本试验以暑绿、苏州青、亮白叶和矮抗五号为材料,筛选了较易再生的不结球白菜品种,并研究了基因型、外植体类型以及不同的激素配比对再生频率的影响,优化了不结球白菜再生体系;并利用根癌农杆菌介导的方法,通过研究Km的适宜筛选浓度及加入时间、不同的外植体类型、预培养时间和共培养时间对转化效率的影响,初步建立了不结球白菜抗病基因遗传转化体系,结果表明:1.不同品种中,暑绿的再生频率最高。不同外植体类型中,子叶-子叶柄再生频率最高。种子发芽培养基中添加TDZ使幼苗生长健壮,利于外植体分化,不定芽分化率均在60%以上,子叶-子叶柄在培养基MN+TDZ0.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+AgNO37.5 mg·L-1中再生频率最高,达到80%,表明TDZ在诱导器官的发生中有较强的持续效应。2.Km的适宜浓度为15mg/L,采用延期筛选的方法进行筛选,下胚轴较子叶-子叶柄有较高的转化效率,预培养和共培养时间均为2天,共培养结束后,经GUS瞬时表达检测为阳性,并获得了卡那霉素抗性的转基因植株,经PCR检测证明InRING基因已整合到不结球白菜核基因组中。
其他文献
马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界第四大粮食作物,其野生种中含有丰富的抗性资源和特殊的性状。但很多野生种与栽培种之间由于胚乳平衡数(EBN)的差异,存在杂交不亲和现象
提高磷肥利用效率和土壤中有效磷的含量是旱作农业和现代农业进一步发展的关键问题。针对黄土高原石灰性土壤区磷素固定较严重的问题,本论文利用长武长期试验站的不同肥力的黑
子午岭北部次生落叶阔叶林是1866年当地人口外迁后,主要在弃耕地上逐渐恢复的,是黄土高原腹地少有的天然林。本文选取黄土高原子午岭次生林区植被恢复过程中坡耕地、弃耕地、
针对目前卷烟工业企业库存烟叶总量大,烟叶质量难以准确判定,烟叶质量与植烟环境关系不明等问题,以及传统烟叶质量评价方法(基于主观权值的指数和法)存在过分依赖专家主观判