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目的:本文就探讨凋瘤丸对体外培养人乳腺癌细胞株MCF-7的诱导凋亡作用及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响的论述。希望能为今后研究中药抗癌机制提供依据和思路,为临床上治疗乳腺癌提供一定的分子生物学依据,以及为该药在临床的应用提供相应的理论基础。方法:用含10%胎牛血清,1%链霉素、青霉素的MEM养液,于37℃,5%CO2孵箱中培养人乳腺癌MCF-7细胞株;1光镜形态学观察:加入凋瘤丸提取液培养48h后,取出细胞片,常规HE染色,运用光学显微镜观察并记录;2 MTT实验:将MCF-7细胞按1×105个/孔接种于96孔板,设置3个复孔,随机分为:凋瘤丸悬液高、中、低浓度药物组,阴性对照组,三苯氧胺对照组。进行MTT试验,计算出细胞增殖抑制率,筛选出最合适的药物剂量;3 Hoechst33258检测试验:取指数生长期的细胞,运Hoechst33258染色法荧光倒置显微镜观察调瘤丸药液作用后人乳腺癌细胞株MCF-7的早期凋亡情况。4 RT-PCR检测将凋瘤丸悬液高、中、低浓度药物组,阴性对照组(不做任何治疗),三苯氧胺对照组三组分别培养作用48小时后,经胰酶消化收集细胞,然后提取细胞MCF-7的RNA。检测在不同分组中caspase-3基因表达量的变化。结果显示:在光学显微镜下,凋瘤丸提取液作用过细胞体积变小、形态变圆,核被染为深蓝色,胞浆呈浅红色,核呈破碎状,染色质颜色凝集加深,凋亡小体形成等;Hoechst染色检测显示;低浓度凋瘤丸组仅见有核凹陷以及小块缺损,但结构完整;随着浓度的增加,凋亡小体(呈现胞质胞核的皱缩,染色质边集浓染,细胞核被浓染而发出亮蓝色强烈荧光,呈现出“新月状”、带状甚至破碎斑块状,又称凋亡小体)而增多,阳性对照组与实验组有相似的作用效果;MTT检测法提示:阴性对照组细胞存活率极高,增殖抑制率接近0;高中低凋瘤丸药物组以及三苯氧胺组均对MCF-7细胞的增殖均起到不同程度的抑制;而且,这种抑制程度随着药物浓度的递增而递增。最大剂量的凋瘤丸组与三苯氧胺组的效果接近。RT-PCR检测结果显示,与阴性对照组相比,各药物处理后的MCF-7细胞中caspase-3均表现为上调表达,其中凋瘤丸悬液高浓度组和三苯氧胺对照组与阴性对照组相比,具有统计学意义,(P<0.05)。而凋瘤丸悬液中浓度组和凋瘤丸悬液低浓度组无统计学意义。凋瘤丸能抑制MCF-7细胞株的增殖,且呈量效的依赖性。最大浓度的结果接近三苯氧胺组无统计学差异(p>0.05),与阴性对照组有统计学差异(P<0.05)。结论:1.凋瘤丸对乳腺癌细胞有诱导凋亡作用,且在一定的范围内,这种抑瘤作用呈量效关系。2.凋瘤丸药物组可以影响caspase-3的表达,使其上调,且通过激活Caspase-3的表达来诱导乳腺癌细胞凋亡。