第一部分耐氟康唑光滑念珠菌MSH2基因突变分析中文摘要目的分析临床分离157株光滑念珠菌对5种抗真菌药物的耐药率,同时探讨临床分离的光滑念珠菌MSH2基因突变与氟康唑耐药的关系。方法收集2017年7月-2018年7月安徽医科大学第一附属医院检验科从临床标本分离获得的157株光滑念珠菌,并对5种抗真菌药物的抗性进行统计。从上述菌株中随机挑取19株氟康唑耐药菌株、15株剂量依赖性敏感(S-DD)菌株以及23株敏感菌株,用微量稀释法对药物敏感性进行验证,对MSH2基因进行Sanger测序检测,并将测序结果与Gen Bank中已发表的序列进行比对,分析每组MSH2基因突变频率及相关突变位点。结果157株光滑念珠菌对伊曲康唑耐药率最高,为27.4%,对氟康唑耐药率为22.9%,对伏立康唑、两性霉素B耐药率分别为5.7%、2.5%,所有菌株对5-氟胞嘧啶不耐药。与敏感组比较,耐药组、S-DD组MSH2基因突变频率显著升高,差异有统计学意义(P<0.0167)。检测到MSH2基因存在G622A/A2669T、G715T这3个突变位点,对应P208S/N890I、V239L 3个氨基酸置换位点;且P208S/N890I仅出现在耐药菌株中。结论临床分离的光滑念珠菌对唑类耐药率比两性霉素B、5-氟胞嘧啶高;光滑念珠菌MSH2基因突变与氟康唑耐药有一定关系。第二部分光滑念珠菌MSH2基因m RNA水平的分析目的探讨临床分离的光滑念珠菌MSH2基因m RNA水平与氟康唑耐药的关系,进一步探讨MSH2基因突变与氟康唑耐药的关系。方法将第一部分实验菌株的19株氟康唑耐药菌株与23株敏感菌株,通过超声波细胞破碎机破壁,Trizol试剂提取总RNA,以标准菌株ATCC MYA-2950为对照组,实时荧光定量PCR方法检测实验菌株MSH2基因m RNA的相对量,使用统计学原理,分析光滑念珠菌MSH2基因m RNA的相对量在氟康唑耐药组与敏感组之间是否存在统计学意义,同时MSH2基因突变组与未突变组之间的MSH2基因m RNA的相对量是否有统计学差异。结果通过实时荧光定量PCR扩增每个实验菌株,氟康唑耐药组MSH2基因m RNA的相对量2-ΔΔCT值与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且在耐药组MSH2基因相对低水平转录;15株MSH2基因未突变菌株中,MSH2基因m RNA低水平的菌株所占百分比为33.33%(5/15),27株MSH2基因突变菌株中,MSH2基因m RNA低水平的菌株所占为88.89%(24/27),MSH2基因未突变组出现m RNA低水平的频率(33.33%)与MSH2基因突变组(88.89%)相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氟康唑耐药与MSH2基因m RNA低水平有关,MSH2基因突变的菌株较多会出现MSH2基因低水平转录,这可能MSH2基因在光滑念珠菌耐药机制中发挥作用的分子基础。