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据世界卫生组织统计,乳腺癌是一种发病率及死亡率都很高的恶性疾病,对人类特别是女性的身心健康影响极大。成年女性有八分之一在其一生中意外罹患乳腺癌,而在妇女恶性肿瘤中,以乳腺癌的风险与死亡风险最大。虽然近数十年来,全球各地研究者已对乳腺癌的发生机理开展了大量深入研究,并获得了十分巨大的成绩,如在乳腺癌分子分型引导下的精确诊断、各类新型靶向药品的成功开发应用等,乳腺癌患者的无进展生存期与总生存期都比过去有了显著的改善,但仍有一部分患者不幸出现病情进展进入晚期。所以,乳腺恶性肿瘤的复发和转移仍对病人的健康和安全带来了很大影响。因此,进一步对乳腺癌发生发展的分子机制进行深入研究仍然很有必要,进而为乳腺癌的精准诊疗提供新的指导与思路。microRNAs（microRNAs,miRNAs,miRs）是一类内源性表达的单链短顺序小RNA,全长约19-25个核苷酸,普遍存在于所有真核细胞中,特点为不编码蛋白质。以往的很多研究成果中,研究者发现micro RNA和很多病症的发生发展都有着很大的联系,包括癌症方面。micro RNA的发现,为乳腺癌发病原因及预后的分子水平研究提供了新的补充,并在乳腺癌的诊断及治疗中有着许多的应用前景。miR-217-5p是一个成熟的序列,是miR-217家族的一个重要的成员。近期的研究发现,miR-217在许多的恶性肿瘤中有着异常表达及作用,但miR-217-5p对乳腺癌发生发展的作用尚无明确的研究。本研究旨在从组织及细胞水平探讨miR-217-5p在乳腺癌中的表达丰度,以及其对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮间质转化的作用及机制的研究,从而了解miR-217-5p对乳腺癌的发生与发展所起到的作用。本课题的研究成果,将加深我们对乳腺癌的起病以及进展机制的了解,为乳腺癌的早期诊断及精准化治疗提供新的方向,并有可能为相关治疗方向提供新的靶标。第一部分miR-217-5p在乳腺癌组织及细胞系中的表达目的:本部分研究旨在研究miR-217-5p在乳腺癌组织及细胞株中的表达情况,并与其相对应的正常组织及正常细胞株进行比较,为进一步探讨其在乳腺癌发生发展中的作用提供研究基础。方法:1.收集35例乳腺癌患者的乳腺癌组织及其相对应的癌旁正常组织,采用RT-qPCR法分别检测miR-217-5p在癌及癌旁正常组织中的表达情况。2.选取正常乳腺上皮细胞株MCF10A及乳腺癌细胞株SK-BR3、BT549、MCF7细胞株,并采用RT-qPCR法分别检测miR-217-5p在每个细胞株中的表达情况结果:1.与乳腺癌旁正常组织对比,miR-217-5p在乳腺癌组织中的表达明显下调,且差异具有明显的统计学意义（P＜0.05）。2.与正常乳腺上皮细胞MCF10A相比,miR-217-5p在细胞株MCF7、BT549、SR-BR3中的表达均明显降低,分别降低了29.24%、70.46%、43.52%,且结果具有统计学意义（P＜0.05）。小结:miR-217-5p在乳腺癌组织及细胞株中的表达均低于其对应的癌旁正常组织及正常乳腺上皮细胞株,可能起到了抑制乳腺癌发生发展的作用。第二部分miR-217-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的影响及机制研究目的:在第一部分的研究基础上,进一步探讨miR-217-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化的功能及可能的相关机制。方法:1.采用脂质体瞬时转染的方法分别将miR-217-5p mimic或inhibitor及其相应对照转入SK-BR3或BT549中,将细胞中的miR-217-5p进行过表达或敲低;2.采用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell法分别检测过表达或敲低miR-217-5p后细胞增殖、迁移及侵袭功能的变化;3.采用RT-qPCR及Western Blot实验分别检测过表达或敲低miR-217-5p后细胞中E-cadherin、Vimentin及slug的表达水平;4.采用RT-qPCR及Western Blot实验分别检测过表达或敲低miR-217-5p后细胞中p65及其磷酸化程度以及IκBα的表达水平。结果:1.采用脂质体瞬时转染miR-217-5p mimic或inhibitor入乳腺癌细胞后,miR-217-5p的表达可上调8168倍或下调55%,差异均具有明显的统计学意义（P＜0.001）。2.通过CCK8法及平板克隆形成实验均发现,在SK-BR3中过表达miR-217-5p后,细胞的增殖能力可受到明显的抑制（P＜0.05）,而在BT549中敲低miR-217-5p后,细胞的增殖能力明显增强（P＜0.05）。通过细胞划痕实验及平板克隆形成实验可发现,在SK-BR3中过表达miR-217-5p后,细胞的迁移及侵袭能力可受到明显的抑制（P＜0.05）,而在BT549中敲低miR-217-5p后,细胞的迁移及侵袭能力明显增强（P＜0.05）;3.RT-qPCR及Western Blot实验均提示,在SK-BR3细胞中过表达miR-217-5p后,E-cadherin表达增强,而Vimentin及slug的表达水平下降,在BT549细胞中敲低miR-217-5p后,E-cadherin表达下降,而Vimentin及slug的表达增强;4.RT-qPCR实验提示,在SK-BR3细胞中上调miR-217-5p后,p65表达下降,而IκBα的表达增强,Western Blot实验则显示,p65的磷酸化程度也出现下调。而在BT549细胞中下调miR-217-5p后,p65及其磷酸化程度均增强,而IκBα的表达则出现下降;小结:miR-217-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,可能通过抑制NF-κB通路而发挥其功能。第三部分miR-217-5p下游靶基因筛选和验证目的:寻找miR-217-5p可能的下游靶基因并进行验证。方法:1.通过Target Scan数据库预测到MTDH为miR-217-5p的下游靶基因,并应用双荧光素酶报告实验进行验证;2.应用RT-qPCR法检测乳腺癌组织及其对应的癌旁正常组织中MTDH的表达情况,并应用Pearson法分析其与miR-217-5p表达情况的相关性;3.采用脂质体法将miR-217-5p mimic或inhibitor及其相应的对照转入SK-BR3或BT549细胞中,并采用RT-qPCR及Western Blot实验检测MTDH的表达情况。结果:1.Target Scan数据库分析显示MTDH为miR-217-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告实验进行验证（P＜0.05）2.在乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中,MTDH的表达均高对其相对应的癌旁正常组织及正常乳腺细胞株。其中MTDH在乳腺癌组织中的表达与miR-217-5p呈明显的负相关（P＜0.05）;3.在乳腺癌中过表达或敲低miR-217-5p后,细胞中MTDH的表达出现下调或上调,提示miR-217-5p对MTDH有负向调控。小结:MTDH是miR-217-5p直接的靶基因。结论:我们的研究可以得出以下主要结论:1)miR-217-5p在乳腺癌组织及细胞株中较正常乳腺组织及细胞株明显下调;2)miR-217-5p可明显抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,并可能通过NF-κB通路发挥作用;3)我们通过生信分析及相关实验证实MTDH为miR-217-5p的直接靶基因。