灰树花多糖及其硫酸化衍生物的结构鉴定和生物活性研究

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灰树花(Grifola frondosa)是一种珍贵的食药兼用菌,多糖成分是其主要的生理活性物质。研究表明,灰树花多糖具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖等多种功效,而要确定这些药理作用的物质基础,就必须分离出均一的多糖组分。由于多糖类物质结构复杂,难于纯化,因此对灰树花多糖药理作用的研究大都停留在粗多糖水平上,从而制约了对灰树花资源的开发和利用。国内外对灰树花多糖组分的分离纯化研究亦有报道,但充分纯化的不多,且大多数都针对的是灰树花碱提组分。本文对灰树花高浓缩精粉的热水提取物进行分离和纯化,并对所得的多糖均一组分进行初步的化学结构研究。为了进一步开发灰树花多糖的药用价值,本文还对所得的均一多糖进行硫酸化修饰并对其结构作初步的分析。同时,对灰树花多糖及其硫酸化衍生物进行生物活性测定。灰树花高浓缩精粉经热水提取获得水溶性灰树花粗多糖GFP。GFP依次经DEAE-cellulose阴离子交换树脂及Sephadex G-100葡聚糖凝胶分离纯化得到GFP1-F、GFP1-M及GFP1-L三种不含蛋白质的葡聚糖纯品,其分子量依次为1.09×105Da、1.93×104Da和2.76×103Da。甲基化结果显示这三种均一多糖所含的糖苷键类型相同,为1,4-,1,3-及1,6-糖苷键,分支点为1,3,6-连接葡萄糖。采用吡啶-氯磺酸法对其进行硫酸化修饰,硫酸化衍生物GFP1-FS、GFP1-MS及GFP1-LS的红外光谱分析表明,三个样品均在1236.90cm-1和811.81cm-1有硫酸酯键的特征吸收峰,13C NMR证明C-6上的羟基被酯化。并且GFP1-FS的硫酸化程度最高,其DS为1.07;GFP1-MS与GFP1-LS的硫酸化程度相当,DS分别为0.66和0.61。MTT结果显示只有GFP1-MS对A549细胞的生长具有较显著的抑制作用。与阿霉素的协同实验结果显示GFP1-FS、GFP1-MS及GFP1-LS与0.2μg/mL阿霉素联用后,能明显提高疗效,其中200μg/mL GFP1-MS与阿霉素的协同效果最好,对A549细胞生长的抑制率可达64.51%。划痕法实验结果表明,GFP1-FS、GFP1-MS及GFP1-LS均具有抑制人微血管内皮细胞(HMEC)迁移的活性,其中GFP1-MS的效果最为显著。
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