转TR1基因水稻及后代的耐热性遗传分析

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目前培育出的耐热性的水稻品种的农艺性状多数不佳,难以直接利用,因此通过植物转基因技术将耐热基因转入水稻,并对转基因水稻的耐热性和农艺性状等指标进行综合分析,这对培育出在生产上有应用价值的耐高温水稻品种有重要意义。TR1基因是从甘蓝型油菜中成功克隆出的一个可提高植物热胁迫抗性的耐热基因,经实验证明能够提高油菜的耐热受性。本研究通过对农杆菌介导法转入TR1基因的粳稻品种日本晴的T0代和T1代再生植株进行耐热性遗传分析,实验取得了以下结果:1.对日本晴T0代和T1代转基因再生植株进行PCR验证,其中254株To代转基因植株中获得TR1+Hyg的PCR双阳性植株155株,阳性检出率为61.02%,67株T1代中获得59株,阳性检出率占88.06%。2.对11株T0代PCR阳性植株进行荧光定量实时PCR分析,结果表明TR1基因在11株转基因植株中表达,但在转基因植株内的表达量存在差异,最高值为7.89,最低值为0.81,这可能和插入的拷贝数和插入的位点有关系。3.对转基因植株T1代自交种子进行潮霉素抗性发芽实验,结果表明:抽取的31个转基因株系中有14个株系T1代植株的白交种子潮霉素抗感分离比符合3:1,遵循孟德尔单基因显性遗传规律。T0代转基因水稻叶片的潮霉素抗性结果与PCR结果一致率达85%以上。4.通过花粉活力测试、电导率检测和叶片脯氨酸含量检测这三个指标比较了转基因植株与非转基因植株在热胁迫和热冲击处理下的耐受性,结果表明:热胁迫处理后,对照的花粉平均染色率(max:70%)都低于转基因水稻(max:85.64%);对照和转基因水稻相对电导率都有所上升,胁迫第5天野生型相对电导率比未胁迫时增加了59.33%,转基因仅增加了10%左右;高温处理转基因T0和T1代,转基因植株脯氨酸含量均比非转基因植株高,叶片脯氨酸含量比对照高出近30%。初步说明TR1基因能提高水稻的耐热能力。5.对T0代和T1代水稻株高、穗长、千粒重和结实率等重要性状进行了分析。结果显示:与对照相比,多数To代和T1代水稻农艺性状产生了不同程度的变异,特别是株高和育性明显下降。T1代中获得了农艺性状发生变异的一些单株,有些显著优于对照,但大多数比对照差,说明外源基因在转化过程中受各种理化因素的影响。
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