目的：Rh血型系统是人类最复杂的红细胞血型系统，也是输血医学最重要的血型系统之一，Rh血型抗原特别是RhD抗原(ISBT004.001；RH1)具有很强的免疫原性，是临床上引致新生儿溶血病、溶血性输血反应的最重要的血型抗原。RHD基因由10个外显子组成，编码区总长为1251bp，编码417个氨基酸组成的糖蛋白。Rh血型有着复杂而丰富的遗传多态性，不仅RhD阴性的分子遗传机制呈现多态性，而且RhD抗原也存在多种变异体，包括弱D型、部分D型和其它D弱表现形式的RhD抗原弱表现型。RhD抗原弱表现型可以引起同种免疫，在临床输血医学实践中有着非常重要的意义。本研究旨在探讨中国汉族人群非血缘关系RhD抗原弱阳性个体的血型血清学表型及其分子遗传背景，了解RhD抗原弱阳性个体在中国人群的分布及不同型别的分布频率，以进一步建立中国人RhD抗原弱表现型的最适定型方式及相关输血策略，保证临床输血的安全。 方法：采用常规血型血清学技术，对非血缘关系的近214000名随机汉族献血者中用单克隆IgG+IgM混合抗-D试剂进行盐水法初筛，盐水介质反应阴性，经抗球蛋白试验确认仍为阴性者，判为RhD阴性个体；盐水介质反应阴性，经抗球蛋白试验确认为阳性者，判为RhD抗原弱表现型；然后用单克隆IgM抗血清对RhD抗原弱表现型标本进行RhD、C、c、E、e抗原表型的检测；采用序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)方法，用对中国人群最常见等位基因的6对序列特异性引物扩增RHD基因，分别检测RhD抗原弱阳性个体的RHD基因的第1、5、6、9外显子，RHD270A基因及DEL基因；采用SSP-PCR方法，用4对序列特异性引物扩增RHCE基因，分别检测RHCE基因的第2内含子(检测RHC)、第2外显子(检测RHc)、第5外显子(检测RHE)、第5外显子(检测Rhe基因)；对RhD抗原弱阳性标本用10对内含子引物分别特异性扩增RHD基因10个外显子，PCR产物纯化后，分别以各外显子的特异性测序引物直接测序，结果用相应软件分析比较；同时用PCR技术测定其RHD合子型或RHD基因数目。 结果：在近214000名随机汉族献血者中，用血型血清学抗球蛋白试验共筛检出RhD阴性个体747例，约占无关供者人群的0.35％；证实为D抗原弱阳性表型的32例，占无关供者人群的0.015％，其中弱D15型18例，RHD基因全长编码区序列分析发现其第6外显子存在一处碱基突变：845G＞A，其它部分与正常RHD序列相同，占D抗原弱阳性表型的56.3％，约占人群的0.00843％；弱D12型1例，为中国人群中首次发现，RHD基因全长编码区序列分析发现该标本的RHD第6处显子存在一处碱基突变：830G＞A，编码区序列其它部分与正常RHD序列相同，占D抗原弱阳性表型的3.1％，约占人群的0.00046％；1例为携带DEL等位基因的弱D型，RHD基因全长编码区序列分析发现该标本的RHD第9外显子存在一处碱基突变：1227G＞A，编码区序列其它部分与正常RHD序列相同，占D抗原弱阳性表型的3.1％，约占人群的0.00046％；8例为部分D表型中的DⅥⅢ型，测序结果显示缺失RHD基因的第3-6外显子，RHD基因序列分析第1、2外显子和第7-10外显子，结果显示与正常RHD序列相同，占D抗原弱阳性表型的25％，约占人群的0.00375％；1例为部分D表型中的DVa(Hus)，RHD基因全长编码区序列分析结果显示第1-4外显子和第6-10外显子与正常RHD序列相同，第5外显子与正常序列相比有8个相异点，即667T＞G，676G＞C，697G＞C，712G＞A，733G＞C，744C＞T,787G＞A，800A＞T，序列与RHCE基因相同，证实RHD基因的第5外显子被RHCE基因替换。DVa占D抗原弱阳性表型的3.1％，约占人群的0.00046％；3例标本10个外显子检测均未见异常，占D抗原弱阳性表型的9.4％，约占人群的0.0014％。Rh小因子检测有3种表型CcEe(4例)、Ccee(10例)、ccEe(18例)，血清学与分子生物学检测一致。RHD杂合性试验鉴定显示仅表型为CcEe的4例标本为纯合型RHD+/RHD+，提示基因型可能为DCe/DcE。其中2例标本为弱D15型，另2例标本中1例为DVa(Hus)部分D型别，1例为携带DEL等位基因的弱D型；其余28例标本为杂合型RHD+/RHD-，推测基因型分别是DCe/dce(10例)和DcE/dce(18例)，其中14例弱D15基因可能存在于DcE单倍体中，2例弱D15基因可能存在于DCe单倍体中，弱D15基因存在于DCe单倍体上的个例在国内外文献中均未见报道。以前在白种人所观察到的弱D12型的弱D基因存在于CDe单倍体中，推测本研究在中国人中发现的弱D12型个例弱D基因存在于DcE单倍体中，不同于白种人；8例DⅥⅢ型的RHD-CE(3-6)-D融合等位基因存在于DCe单倍体中；还有3例标本未检测出10个外显子序列有异常，推测基因型是DcE/dce。 结论：研究表明中国汉族人群D弱表现型占无偿献血人群的0.015％，明显低于白种人(0.2％-1％)，且分子遗传背景呈现多样性，有多种D弱表现型存在；汉族人群D弱表现型中，弱D15型频率最高，占56.3％，在白种人中，70.3％为弱D1型；汉族人群部分D(partialD)的弱表现型中，DⅥⅢ型占主要比率。 研究首次在中国人群中观察到弱D12型，弱D基因所存在的单倍体不同于白种人。根据对RHD基因数目分析，推测中国人群中弱D15基因存在于DCe和DcE单倍体上，其中弱D15基因存在于DCe单倍体上的个例在国内外文献中均未见报道。 这是国内首次对中国汉族人群RhD抗原弱阳性分子背景的系统研究报道，填补了国内Rh血型研究领域的这一空白，在临床上有着极为重要的免疫学意义。