锡兰钩虫、犬钩虫和管型钩虫是全球分布广泛的寄生虫,可感染人和犬、猫等多种动物,引起以贫血和腹泻为主的钩虫病。本研究以我国华南地区流浪犬猫钩虫为研究对象,以ITS1序列为分子标记,运用HRM和ARMS-qPCR技术建立犬猫源钩虫HRM和Multi-ARMS-qPCR分子检测技术,为犬猫源钩虫的流行病学调查、人畜共患风险评估和钩虫病疗效考核提供新的技术手段。1.犬猫源钩虫HRM分子检测方法的建立。以ITS1序列为分子标记,运用HRM技术对我国华南地区常见的锡兰钩虫、犬钩虫和管型钩虫进行检测。结果显示设计的HRM-F/HRM-R引物能将这三种钩虫分别检测出来,在对HRM方法的稳定性、敏感性和准确性试验中,批内溶解曲线完全吻合,批间的变异系数小;HRM方法对犬猫源钩虫的最低检测浓度为5.69×10^-4ng/μL;对18个样品的检测结果与测序结果完全一致。结果表明,建立的HRM检测方法具有高效、稳定、敏感和准确的优点,可适用于犬猫源钩虫的临床检测和流行病学调查。2.HRM与PCR-RFLP方法对犬猫源钩虫临床检测效果的比较。以通用引物An-F/An-R对98份临床样品DNA进行ITS1序列扩增,采用EcoR II和RsaI限制性内切酶对其PCR产物进行酶切分析;同时与HRM方法的检测结果进行比较。结果显示,HRM方法检出42份阳性,包括锡兰钩虫6份、犬钩虫15份、管型钩虫4份、犬钩虫和锡兰钩虫混合感染17份。PCR-RFLP仅检出39份阳性,其中锡兰钩虫4份、犬钩虫18份、管型钩虫4份、犬钩虫和锡兰钩虫混合感染13份。结果表明HRM方法检出率高,尤其是对混合感染的检测。因此,HRM方法对犬猫钩虫临床检测的效果比PCR-RFLP方法更好。3.犬猫源钩虫ARMS-qPCR分子检测方法的建立。以ITS1序列为靶基因,基于该序列的三个SNP位点（ITS253,ITS150,ITS78）设计锡兰钩虫、管型钩虫和犬钩虫特异性引物（ARMS-Cey/F、ARMS-Tub/F和ARMS-Can/F）,运用qPCR技术对三种钩虫进行检测。结果显示三对特异性引物能将锡兰钩虫、管型钩虫和犬钩虫分别检测出来,三对引物中ARMS-Cey和ARMS-Tub引物特异性良好,而ARMS-Can引物特异性较差需进行退火温度优化,ARMS-Can在Multi-ARMS-qPCR中特异性良好。结果表明三种钩虫的ARMS-qPCR方法已基本建立,可用于后续Multi-ARMS-qPCR分子检测方法的研究。4.犬猫源钩虫Multi-ARMS-qPCR分子检测方法的建立。基于锡兰钩虫、管型钩虫和犬钩虫单一ARMS-qPCR方法,建立同时检测三种钩虫的Multi-ARMS-qPCR方法。结果显示其溶解曲线产生三个特异峰,琼脂糖电泳显示锡兰钩虫、管型钩虫和犬钩虫的特异性条带分别为268 bp、170 bp和94 bp。三种钩虫线性相关系数分别为0.994、0.999和0.999,其扩增效率分别为94%、102%和97%,其定量检测下限分别为104虫卵/克、2虫卵/克和1虫卵/克,批内和批间稳定性好。50份临床样品中检出犬钩虫8份、管型钩虫2份、锡兰钩虫和犬钩虫混合感染5份、犬钩虫和管型钩虫感染2份;在10份单一感染的样品中,重度感染有3份（C≥100）,轻中度感染有5份（10≤C<100）,其余2份为轻度感染（C<10）。结果表明,建立的Multi-ARMS-PCR方法特异、稳定,可定量分析,弥补了传统检测方法的不足,可为犬猫源钩虫的人畜共患风险评估和疗效考核提供新的技术手段。