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目的:
1.观察失血性休克血清对培养的人脐静脉内皮细胞NF-κB活化的影响。
2.参附注射液对其的干预作用(12h时间点)。
方法:
1.将30只健康SD大鼠随机分为3组:正常对照组、假休克组、失血性休克组,每组10只。除对照组和假休克组外,其余大鼠均在15min内放血致血压达40mmHg维持60分钟,即休克模型复制成功,各组均于3小时后取血。
2.空白对照组采用10%FBS+90%RPMI-1640培养基培养:正常对照组采用10%正常对照组血清+90%RPMI-1640培养基培养;失血性休克组将10%休克组血清+90%RPMI-1640培养基培养,然后将HUVEC接种于6孔培养板中,用上述各种不同培养液分别干预6h、12h和18h。通过蛋白免疫印迹法(Westernblotting)技术检测刺激后人脐静脉内皮细胞胞核NF-κBp65的表达。
3.空白对照组采用10%FBS+90%RPMI-1640培养基培养;正常对照组、假休克组、失血性休克组均采用10%各组血清+90%RPMI-1640培养基培养,失血性休克血清加参附注射液干预组培养细胞,参附注射液100ul/ml,先于休克血清1h加入。然后将HUVEC接种于6孔培养板中,用上述各种不同培养液干预12h。通过蛋白免疫印迹法(Westernblotting)技术检测刺激后人脐静脉内皮细胞胞核NF-κBp65的表达。
结果:
1.与空白对照组、正常对照组比较,休克组血清刺激人脐静脉内皮细胞12h、18h后,NF-κBp65表达升高,均具有统计学意义(P<0.05)。
2.与空白对照组、正常对照组比较,休克组血清刺激人脐静脉内皮细胞6h后,NF-κBp65表达无明显升高,无统计学意义(P>0.05)。
3.与休克组血清刺激人脐静脉内皮细胞18h比较,休克组血清刺激人脐静脉内皮细胞12h后,NF-κBp65表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。
4.与空白对照组、正常对照组及假休克组比较,休克组血清刺激内皮细胞12小时后,NF-κBp65表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。
5.与空白对照组、正常对照组及假休克组比较,休克血清加参附干预组刺激内皮细胞12小时后,NF-κBp65表达无明显升高,无统计学意义(P>0.05)。
6.与空白对照组、正常对照组相比,假休克组刺激12小时后,NF-κBp65表达无明显升高,无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1.失血性休克血清可致培养的人脐静脉内皮细胞NF-κBp65发生核移位,进而活化NF-κB。
2.参附注射液对休克血清所致的人脐静脉内皮细胞NF-κB的活化有抑制作用。