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目的:目前已有研究证实与正常孕妇相比,子痫前期孕妇外周血胎盘源性微囊泡(placental-derived microvesicles,pcMVs)水平明显升高。同时文献研究采用胎盘绒毛组织机械震荡、绒毛组织体外培养和胎盘子叶灌注三种不同方法制备胎盘源性微囊泡进行体外实验,发现胎盘源性微囊泡可能与内皮细胞功能障碍、炎症反应和凝血纤溶失衡有关。本实验在上述三种制备方法的基础上,以及参考脑源性微囊泡的制备方法,采用冻存绒毛组织研磨法制备胎盘源性微囊泡,并且与重度子痫前期孕妇外周血微囊泡进行对比鉴定,观察两者在形态以及功能活性的差异。探讨建立一个改良型制备方法,利于体外实验进行胎盘源性微囊泡与子痫前期发病机制相关性研究。方法:1)正常孕妇剖宫产时取胎盘组织,采用免疫组织化学法鉴定选取的样本组织为绒毛组织;2)胎盘绒毛组织采用组织匀浆器研磨分步离心的方法体外制备pcMVs,同时抽取重度子痫前期孕妇外周血分步离心的方法体外制备外周血微囊泡;3)用透射电镜、流式细胞仪和Nanosight方法鉴定所得的研磨法pcMVs和外周血微囊泡的形态学及表型;4)用半自动凝血仪TS6000,体外检测研磨法pcMVs和外周血微囊泡两组的凝血酶原时间(Prothrombin time,PT),比较促凝活性;5)应用Transwell小室系统检测研磨法pcMVs和外周血微囊泡穿透人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的能力;6)应用离子电导显微镜观察研磨法pcMVs和外周血微囊泡两组分别对HUVEC之间的细胞连接以及细胞形态的影响。结果:1)免疫组织化学法结果显示胎盘组织能表达合体滋养细胞的特异性标记物---胎盘碱性磷酸酶,证实选取部位的组织为绒毛组织;2)胎盘绒毛组织研磨制备的pcMVs和子痫前期外周血离心制备的微囊泡在透射电镜下观察均具有膜结构;3)流式细胞术结果显示胎盘研磨法制备的pcMVs能表达大量的合体滋养细胞特异性标记物,而基本不表达血小板、红细胞、白细胞和内皮细胞的标志物。子痫前期孕妇外周血微囊泡也能表达合体滋养细胞特异性标记物,少部分表达血小板、红细胞、白细胞标志物和基本不表达内皮细胞的标志物;4)Nanosight结果显示两组制备的微囊泡的粒径范围大都在100-500nm之间;5)促凝实验中,与PBS溶剂对照组相比,胎盘研磨法pcMVs和子痫前期孕妇外周血微囊泡组的凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)均明显缩短(p<0.001),显示两组制备的微囊泡均具有促凝活性,而与外周血微囊泡组相比,胎盘研磨法pcMVs的PT值明显缩短(p<0.001);6)两组微囊泡均能穿透HUVEC,并且研磨法pcMVs穿透能力高于外周血微囊泡;7)胎盘pcMVs能破坏HUVEC之间的连接,增大细胞间的缝隙,并且引起内皮细胞形态改变,细胞高度明显增加;外周血微囊泡也能破坏细胞连接,使内皮细胞形态发生改变。结论:1)通过胎盘绒毛组织研磨分步离心的方法在体外成功大量制备了微囊泡,具有完整的膜结构、能高表达滋养细胞特异性标记物并且直径大小范围符合微囊泡定义,并且与子痫前期外周血微囊泡形态特征相符合;2)体外利用研磨法制备的胎盘pcMVs具有促凝活性,并且会引起内皮细胞通透性增加,损害内皮细胞等功能活性,为后续研究pcMVs与子痫前期发病机制相关性提供了充足的原料。