长根菇的液体发酵工艺及生物活性研究

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长根菇(Collybia radicata)是一种珍稀药食兼用菌,味道鲜美,富含多糖、脂肪酸、蛋白质、氨基酸、矿物元素等多种营养成分,其发酵产物丰富,具有良好的抑菌功效,其多糖具有抗氧化活性、增强机体免疫活性和抑制肿瘤等作用。目前对长根菇的研究主要集中在驯化、栽培方面,而对长根菇液体发酵、发酵液抑菌活性、长根菇多糖的分离纯化及抗氧化活性方面的研究尚未见报道。本论文的主要研究内容包括:长根菇的液体培养工艺研究、发酵液抑菌活性的初步研究、多糖分离纯化及多糖的抗氧化作用研究。1.配方筛选的结果表明:在摇瓶水平上对培养基进行了单因素试验,筛选出最佳的碳源、氮源、无机盐、生长因子,采用正交试验,得出适合长根菇液体发酵培养最适培养基配方为:碳源蔗糖30g/L,氮源豆饼粉9g/L,无机盐KH2PO4和MgSO4·7H2O组合浓度为5g/L+2.5g/L,生长因子维生素B1 0.2g/L;单因素试验获得了最佳摇瓶培养条件是:培养温度为26℃,装液量为250 mL摇瓶装液量100mL,摇瓶转速为180r/min,接种量为10%(v/v),起始pH值5.5。验证试验表明,应用上述条件进行液体发酵,菌丝体干重达到1.514g/100mL,胞外多糖最高可达0.291g/100mL。2.长根菇发酵液对几种常见的病原菌均有一定的抑制效应。对7种供试细菌的抑菌试验结果表明,发酵液对胡萝卜软腐欧文氏菌的抑制作用最强,抑菌圈直径达4.3mm。在6种供试病原真菌菌株中抑菌试验结果表明,对稻瘟病菌的抑制作用最强,达到99%以上。稳定性试验表明,发酵时间11~13d之间抑菌活性最强;抑菌活性随温度的升高而降低,但100℃处理发酵液后抑菌活性仍高达52.804%;在pH值5.5~7.0条件下抑菌活性较高;发酵液的抑菌活性对紫外线敏感。3.抗氧化试验结果表明,长根菇不同来源的多糖(干菌丝多糖、鲜菌丝多糖、胞外多糖、菌盖多糖、菌柄多糖)和发酵原液的均有一定的抗氧化活性。各种不同来源的多糖对DPPH·均有较强的清除力,其中以干菌丝多糖清除活性最强,EC50(DPPH·)值为0.394mg/mL,且随浓度的增加清除力增加。与阳性对照维生素C和维生素E相比,长根菇不同来源多糖,DPPH·清除率优于维生素E,但比维生素C差。还原力测定发现随着多糖浓度的增加,还原力增加。其中胞外多糖和干菌丝多糖还原力最大,EC50(还原力)值分别为0.478mg/mL和1.068mg/mL。与阳性对照维生素C相比,还原力没有维生素C强。各种不同来源的多糖对铁离子均有较强的螯合力,且随浓度的增加铁离子螯合力增加,其中鲜菌丝多糖的铁离子螯合力最大,EC50(铁离子螯合力)值为0.126mg/mL。与阳性对照EDTA相比,铁离子螯合力没有EDTA大。
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