浊点萃取—高效液相色谱法检测牛奶中的双酚A和壬基酚

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牛奶的营养价值非常高,不但可以满足老年人和儿童的营养需求并且能够增强人们的体质。现在我国奶牛业的快速的发展,居民消费水平的不断的提高,人们对牛奶的消费量也随之大幅提高,与此同时人们对牛奶的安全性也提出了更高的要求。大量实验证明从矿泉水瓶、医疗器械到食品包装的内里,大多都含有双酚A (bisphenol A, BPA)和壬基酚(nonylphenol, NP),现代医学研究认为双酚A和壬基酚达到一定剂量能够威胁人体的健康。据研究表明,烷基酚中的双酚A、壬基酚等化学物质均显示出了不同雌激素的活性。烷基酚聚氧乙烯醚是一种非常重要的非离子型表面活性剂,它广泛的应用于洗涤剂和家用或工业的塑料产品中,烷基酚是它最终的降解产物。4-NP和BPA本身可以作为化工原料,也可以广泛的应用于多聚碳酸酯和环氧树脂的生产中,在塑料的生产中也可以用作抗氧化剂,因此牛奶的包装袋中含有环境内分泌干扰物双酚A和壬基酚威胁着乳品安全。本文介绍了浊点萃取技术的原理以及其发展,并对牛奶中双酚A和壬基酚的富集、提取和高效液相色谱的检测条件进行了探索与研究,建立了浊点萃取-高效液相色谱法检测牛奶中双酚A和壬基酚的理想方法。主要研究结果如下:(1)建立了浊点萃取技术对牛奶中的双酚A和壬基酚目标物进行富集分离,实验过程中优化了破乳条件以及浊点萃取的条件。实验确定了冰乙酸的用量为0.20mL,无水硫酸钠的用量为0.90g,离心条件为5℃、10000rpm条件下离心10min的最优破乳因素,此时清液最清;确定了以100g/L Tween20水溶液为萃取表面活性剂,正丁醇的添加量为0.20mL、无水硫酸钠的添加量为0.20g,平衡温度为60℃,平衡时间为30min的浊点萃取条件。(2)建立了高效液相色谱-紫外检测器法分析双酚A和壬基酚,实验优化了流动相条件和色谱条件。在已选定的色谱条件下,流动相为乙腈(A)和水(B)的混合溶液,经Inertsil ODS-3(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,于200nm下按照梯度洗脱程序对双酚A和壬基酚混合标准溶液进行色谱分析。洗脱程序为:(A)为45%保持8min,之后升至65%,保持27min。流速为:1mL/min,柱温为:30℃。在优化的此条件下双酚A和壬基酚能够较好的分离,峰型对称,且避开了牛奶中杂质和表面活性剂的干扰;实验结果表明:在三个添加水平上(0.05、0.10、0.20μg/mL)双酚A的添加回收率在85.60-91.20%之间,在三个添加水平上(0.10、0.20、0.50μg/mL)壬基酚的添加回收率在71.30~73.30%之间,标准偏差3.42-9.85%,实验结果较准确,精密度较高,符合环境药物残留检测的要求。双酚A在0.05~2.00μg/mL范围内线性关系良好,壬基酚在0.10~10.00μg/mL内线性关系良好,相关系数都大于0.999;LOD值为2.23μg/kg~9.79μg/kg,均低于限量要求。(3)本实验建立了浊点萃取-高效液相色谱法检测牛奶中的双酚A和壬基酚,解决传统萃取方法存在的问题,研究并建立安全、经济、高效,符合农残分析的检测方法。
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