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首先对扫描电化学显微镜(SECM)的实验装置和工作模式进行了简要的介绍。然后就SECM的下述两个方面进行了较详细的介绍。1.介绍了SECM探头的发展。2.介绍了SECM在细胞和酶分析方面的应用。
第一章制作了双金微米电极,对其进行了表征,并与单根金微米电极的表征结果进行了比较,结果显示两者无显著性差异。并将此电极用作SECM的探头分别作了向导体基底和绝缘体基底的探头逼近曲线,与理论曲线拟合后基本重合,说明我们做的双电极能用作SECM实验中。
第二章用扫描电化学显微镜同时成像单个活细胞内的过氧化物酶活性和细胞形貌。首先,用SECM的收集模式确定了测定PO的最佳条件。又利用毛地黄皂苷(Dig)能溶解细胞膜上的胆固醇的性质,在细胞膜上产生微孔。细胞内的大分子(如酶)仍然被禁锢在细胞内部,而小分子物质(如酶的底物和产物)则可以进出细胞。经过Dig处理后的细胞仍能存活。当溶液中加入PO的底物(H2Q和H2O2)后,它们可以扩散到细胞内,并在细胞内PO的催化下反应生成BQ和水。将双电极探头的一支电极的电位恒定于BQ发生还原反应的电位,用SECM就可以测得细胞周围BQ在探头上产生的电流,获得细胞表面BQ浓度分布的形貌图。同时溶液中加入K4Fe(CN)6,将另一根电极的电位恒定于K4Fe(CN)6发生氧化反应的电位,当探头扫过细胞时,由于细胞有一定的高度,所以K4Fe(CN)6的氧化电流会有所降低(此时细胞相当于一个绝缘体基底),从而测得了细胞的形貌。
第三章用SECM同时测得了单个鼠肝细胞中的碱性磷酸酶(ALP)和细胞的呼吸活性。首先用收集模式确定了检测ALP的最佳条件。用毛地黄皂苷(Dig)对细胞进行穿孔。然后加入酶的底物(PAPP),在ALP的催化水解下生成PAP。将双电极探头的金电极电位恒定于PAP发生氧化反应的电位,用SECM就可以测得细胞周围PAP在探头上产生的电流,从而测得细胞内ALP的活性。同时固定另一根电极(铂电极)的电位为O2发生还原反应的电位,由于细胞呼吸要消耗氧,所以细胞周围O2的浓度要比本体溶液的低,由此我们就可以通过测定细胞周围O2浓度的变化而引起的探头电流的变化来获得细胞的呼吸活性信息。