H5N6亚型禽流感病毒是由H5N1与H6N6亚型的禽流感病毒重组而来,其中NA基因来源于H6N6,其余基因来源于H5N1。而这一特点使其具有了H5N1亚型禽流感病的一些特征。1997年,香港首次出现人感染HPAI H5N1亚型流感病毒,之后多个国家都陆续报道人感染高致病性禽流感病毒并死亡的事件。2004年,暴发于我国及东南亚一些国家的H5N1禽流感给养禽业造成了巨大的损失,并对人类的公共卫生造成了极大的影响。HPAIV H5N1感染人的致死率超过60%,也已有报道H5N6亚型流感病毒感染人并死亡的报道,这意味着H5N6亚型禽流感病对人类的健康具有潜在的威胁。因此H5N6亚型禽流感病毒对哺乳动物致病力的研究是一项十分重要的课题。为研究H5N6亚型禽流感病毒跨越种间屏障适应哺乳动物分子标志,本研究采用对小鼠无致病性的禽流感病毒A/Swine/Guangdong/1/2014 H5N6（简称为GD1）,使其在6周龄的雌性BALB/c小鼠体内进行连续传代,获得了小鼠适应毒株。以10⁶ EID₅₀剂量的病毒感染6周龄的雌性BALB/c小鼠后,发现适应毒株致死率明显高于野生型毒株。通过检测不同脏器中病毒含量发现,适应毒株不仅在小鼠肺脏中具有很高的复制效率,而且在鼻甲、脑与脾中复制。基因分析发现,小鼠适应毒株的PB2蛋白的627位点由E（谷氨酸）突变为K（赖氨酸）,PB1蛋白的598位由L（亮氨酸）突变为Q（谷氨酰胺）,HA蛋白的239位由R（精氨酸）突变为C（半胱氨酸）,M蛋白106位由D（天冬氨酸）突变E。为研究这四个氨基酸位点在小鼠适应中的作用,我们将病毒基因构建于pBD载体上,并利用定点突变技术将PB2蛋白的627位点由E突变为K,PB1蛋白的598位由L突变为Q,HA蛋白的239位由R突变为C,以及M蛋白106位由D突变E。然后拯救出重组病毒,并使用重组病毒接种小鼠发现拥有PB2蛋白的627位K,PB1蛋白的598位Q突变的毒株导致小鼠显著的体重下降与死亡,而拥有M蛋白106位E突变的毒株与HA蛋白的239位C的毒株在感染小鼠后并未导致小鼠发病和体重下降,通过检测获救毒株在小鼠各个脏器中的复制情况发现,拥有PB2蛋白的627位K的获救毒株不仅在肺脏中具有很高的复制效率也可以在鼻甲、脑与脾中复制。拥有PB1蛋白的598位Q突变的毒株也在小鼠的肺、鼻甲和脑中被检测到。除拥有M蛋白106位E突变的毒株有一只小鼠在脾中有轻微复制,M蛋白106位E突变的毒株与HA蛋白的239位C的毒株只在肺脏中检测到复制。聚合酶活性试验发现PB2蛋白的627位为K与PB1蛋白的598位为Q时可以显著增加聚合酶活性。从而我们认为这两个位点在小鼠适应性过程中扮演重要作用。本研究结果揭示了H5N6亚型禽流感病毒适应小鼠的分子标志,同时为进一步研究禽流感病毒能够跨越种间适应并感染哺乳动物的现象提供科学理论依据。